由于在過去的六十年中氯乙酰胺類除草劑的大量使用,微生物已經(jīng)進化出礦化這些化合物的途徑。在氯乙酰胺類除草劑微生物代謝的上游途徑中,通過N-脫烷基和酰胺水解轉(zhuǎn)化為兩種常見的代謝產(chǎn)物2-甲基-6-乙基-苯胺（MEA）和2,6-二乙基苯胺（DEA）。下游途徑中MEA代謝是由芳香環(huán)羥基化起始,經(jīng)過幾步轉(zhuǎn)化成為開環(huán)底物。整個途徑中大多數(shù)的上游基因已經(jīng)被確定,而負責MEA初始羥基化及開環(huán)的基因卻還未報道,對此我們展開了以下研究:1.MEA代謝突變菌株的獲得及其代謝途徑分析本研究以能完全礦化MEA的菌株Sphingobium baderi DE-13為出發(fā)菌株,通過連續(xù)傳代獲得兩株代謝MEA的突變菌株DE-13-D2和DE-13-E9。其中菌株DE-13-D2失去了完全礦化MEA的能力,能轉(zhuǎn)化MEA并積累中間物質(zhì),而菌株DE-13-E9則完全失去MEA降解能力。利用HPLC-MS/MS的方法對突變菌株DE-13-D2代謝MEA所積累的中間物進行鑒定,經(jīng)MS/MS分析鑒定出:4-羥基-2-甲基-6-乙基苯胺（4-OH-MEA）,2,6-甲乙基對苯醌亞胺（MEBQI）,2,6-甲乙基對苯二酚（MEHQ）。... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－６苯胺雙加氣酶基因蔟示意圖??Ｆｉｇ．?１－６?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｄｉａｇｒａｍ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｇｅｎｅ?ｃｌｕｓｔｅｒ?ｏｆ?ａｎｉｌｉｎｅ．??

?ＤＥ－１３的突變株，能轉(zhuǎn)化ＭＥＡ和ＤＥＡ并累積中間產(chǎn)物??ＰＣＲ擴增提取的質(zhì)粒ＤＮＡ的結(jié)果如圖２－１所示。將１６Ｓ?ｒＲＮＡ測序的結(jié)果上傳??至ｅｚｔａｘｏｎ網(wǎng)站進行在線的比對，發(fā)現(xiàn)兩株菌的１６Ｓ?ｒＲＮＡ與畫序列??一致性為１００％，因此確認菌株無誤后－７０°Ｃ甘油管保存。??Ｍ?１?２?３?４??２０００?二、…々：：人心？＇丄??１５００?：ｔ?４??ｌｏｏｏ??圖２－１菌株ＤＥ－１３－Ｄ２、ＤＥ－１３－Ｅ９的的１６Ｓ?ｒＲＮＡ電泳圖譜??Ｆｉｇ．?２－１?Ａｇｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｃｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?１６Ｓ?ｒＲＮＡ．??Ｍ：?ＤＬ２０００?ｍａｒｋｅｒ?；】：ｃｋ＋；２：ｃｋ－；?３：?１６Ｓ?ｒＲＮＡ?ｇｅｎｅ?ｏｆ?ｓｔｒａｉｎ?ＤＥ－１３－Ｄ２?；４：?１６Ｓ?ｒＲＮＡ?ｇｅｎｅ?ｏｆ?ｓｔｒａｉｎ??ＤＥ－１３－Ｅ９．??兩株ＭＥＡ和ＤＥＡ代謝突變菌株ＤＥ－１３－Ｅ９和ＤＥ－１３－Ｄ２和野生菌株ＤＥ－１３對??ＭＥＡ的降解情況見圖２－２所示。可以看出ＤＥ－１３野生菌株可以完全降解ＭＥＡ，突變??菌株ＤＥ－１３－Ｅ９不能降解ＭＥＡ，而突變菌株ＤＥ－１３－Ｄ２代謝ＭＥＡ積累產(chǎn)物，該產(chǎn)物??在２６０?ｎｍ處有特征吸收峰。??２?５０

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【參考文獻】：
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本文編號：3559389