由禾頂囊殼小麥變種Gaeumannomyces graminis var.tritici引起的小麥全蝕病是危害極大的小麥土傳真菌病害。本研究以小麥全蝕病菌β-tubulin為靶標(biāo)基因設(shè)計(jì)重組酶聚合酶擴(kuò)增技術(shù)（recombinase polymerase amplification,RPA）引物Gg-RPA-F/Gg-RPA-R和RPA探針Gg-LF-Probe,結(jié)合側(cè)流層析試紙條,建立了小麥全蝕病菌RPA快速檢測(cè)方法,該方法在38℃恒溫條件下30 min內(nèi)完成可視化檢測(cè),擺脫P(yáng)CR儀等儀器設(shè)備的限制。小麥全蝕病菌RPA快速檢測(cè)方法具有較高的檢測(cè)特異性,其檢測(cè)極限為10 pg/μL,與普通PCR一致。此外,小麥全蝕病菌RPA快速檢測(cè)方法可從土壤中快速檢測(cè)到小麥全蝕病菌,具有較強(qiáng)的實(shí)用性。因此,本研究建立的小麥全蝕病菌RPA快速檢測(cè)方法具備簡(jiǎn)便高效、實(shí)用性強(qiáng)的特點(diǎn),為小麥全蝕病菌的快速檢測(cè)和病害早期診斷提供新技術(shù)。 

【文章來源】：植物保護(hù). 2020,46(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

小麥全蝕病菌RPA檢測(cè)方法的建立

將小麥全蝕病菌基因組DNA進(jìn)行10倍梯度稀釋,并以稀釋液為模板分別進(jìn)行RPA反應(yīng)和普通PCR擴(kuò)增。結(jié)果顯示,1#～5#側(cè)流層析試紙條檢測(cè)呈陽性,而6#側(cè)流層析試紙條檢測(cè)呈陰性,表明RPA對(duì)小麥全蝕病菌基因組DNA的檢測(cè)極限為10 pg/μL(圖3a);普通PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),泳道1～泳道5均呈現(xiàn)248 bp的清晰條帶,而泳道6無擴(kuò)增產(chǎn)物,表明普通PCR對(duì)小麥全蝕病菌基因組DNA的檢測(cè)極限亦為10 pg/μL(圖3b)。2.4 小麥全蝕病菌RPA檢測(cè)在土壤樣品檢測(cè)中的應(yīng)用

對(duì)安徽地區(qū)9份疑似小麥全蝕病發(fā)病田塊的土壤基因組DNA進(jìn)行RPA反應(yīng)和PCR擴(kuò)增。結(jié)果顯示,RPA從8份土壤中成功檢測(cè)到小麥全蝕病菌,1份土壤不攜帶小麥全蝕病菌,陰性對(duì)照亦未檢測(cè)到小麥全蝕病菌(圖4a)。普通PCR檢測(cè)結(jié)果與RPA檢測(cè)結(jié)果一致(圖4b),表明RPA技術(shù)可快速準(zhǔn)確地從發(fā)病土壤中檢測(cè)到小麥全蝕病菌(表2)。圖4 土壤樣品中小麥全蝕病菌的RPA檢測(cè)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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