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葉螨乙酰膽堿酯酶在pColdⅡ中的表達(dá)及活性分析

發(fā)布時(shí)間:2021-12-29 12:14
  【目的】為了獲得較高活性的螨AChE重組蛋白!痉椒ā繉⑷~螨ace基因全長(zhǎng)和去疏水區(qū)兩種形式分別在pColdⅡ與pET-30a載體中表達(dá),比較它們的表達(dá)效果!窘Y(jié)果】AChE在兩種載體中成功表達(dá),得到了較高純度的AChE。與載體pET-30a比,AChE蛋白在pColdⅡ表達(dá)載體中的表達(dá)量、酶活性以及對(duì)毒扁豆堿的敏感性都更高,去掉羧基端疏水區(qū)有助于提高AChE的活性!窘Y(jié)論】此研究建立高活性AChE的表達(dá)系統(tǒng),獲得了大量活性較高的AChE重組蛋白,為AChE抑制劑的篩選提供試驗(yàn)基礎(chǔ)。 

【文章來源】:北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào). 2020,35(04)

【文章頁數(shù)】:6 頁

【部分圖文】:

葉螨乙酰膽堿酯酶在pColdⅡ中的表達(dá)及活性分析


各種AChE對(duì)毒扁豆堿敏感性的比較

蛋白,形式,野生型,酶活力


Ni-NTA純化濃縮后,用SDS-PAGE分析和Western Blot檢測(cè)。如圖3所示, AChE重組蛋白去疏水區(qū)后的條帶以及野生型全長(zhǎng)AChE重組蛋白的條帶大小與預(yù)期一致,說明AChE在pCold Ⅱ與pET-30a中表達(dá)成功,獲得的AChE蛋白符合后續(xù)試驗(yàn)要求。2.4 不同形式AChE酶活力比較

葉螨乙酰膽堿酯酶在pColdⅡ中的表達(dá)及活性分析


不同形式AChE酶活比較

【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]農(nóng)用乙酰膽堿酯酶抑制劑研究進(jìn)展[J]. 李夢(mèng)怡,彭博,李博,邵文華,楊金,付欣,師光祿,卜春亞.  生物技術(shù)進(jìn)展. 2017(02)
[2]基于殺螨劑靶標(biāo)朱砂葉螨乙酰膽堿酯酶體外表達(dá)的新型殺螨活性化合物篩選[J]. 彭博,卜春亞,師光祿,李金玲,馮曉姣,韓晶玉.  應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào). 2016(01)
[3]朱砂葉螨乙酰膽堿酯酶的表達(dá)純化及其酶活測(cè)定條件優(yōu)化[J]. 彭博,師光祿,卜春亞,王有年.  北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào). 2015(04)
[4]朱砂葉螨乙酰膽堿酯酶的原核表達(dá)及其活性分析[J]. 彭博,卜春亞,師光祿,李金玲,馮曉姣,韓晶玉,高品,王有年.  應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào). 2015(02)
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[6]來源于天然產(chǎn)物的乙酰膽堿酯酶抑制劑研究進(jìn)展[J]. 樓影涵,査曉明,張莉莉,張茵,徐云根,張陸勇.  藥學(xué)進(jìn)展. 2012(09)
[7]我國(guó)朱砂葉螨研究進(jìn)展[J]. 劉波,桂連友.  長(zhǎng)江大學(xué)學(xué)報(bào)(自科版)農(nóng)學(xué)卷. 2007(03)
[8]乙酰膽堿酯酶抑制劑的研究現(xiàn)狀[J]. 王淑月,劉亞妹,姚道魯,高記華.  承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2002(04)

博士論文
[1]東亞飛蝗乙酰膽堿酯酶基因克隆及其功能研究[D]. 周小霞.重慶大學(xué) 2009
[2]甘草黃酮的分離鑒定、藥效及其指紋圖譜研究[D]. 崔永明.華中科技大學(xué) 2008

碩士論文
[1]昆明鼠乙酰膽堿酯酶克隆表達(dá)與活性測(cè)定[D]. 張立媛.華中師范大學(xué) 2008
[2]家蠅乙酰膽堿酯酶基因的克隆、突變、表達(dá)與應(yīng)用研究[D]. 陳艷霞.浙江大學(xué) 2007



本文編號(hào):3556108

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