東方蜜蜂微孢子蟲（Nosema ceranae）是一種專性侵染蜜蜂中腸上皮細胞的真菌性病原,可導(dǎo)致蜜蜂罹患微孢子蟲病,嚴(yán)重危害養(yǎng)蜂生產(chǎn)。N.ceranae起源于東方蜜蜂（Apis cerana）,但研究表明其對西方蜜蜂（Apis mellifera）的危害更大。前人對成年蜜蜂與N.ceranae的相互作用開展了大量研究,但有關(guān)蜜蜂幼蟲與N.ceranae的互作研究十分匱乏。此前,有個別研究報道N.ceranae能侵染西方蜜蜂幼蟲。為探究N.ceranae對意大利蜜蜂（Apis mellifera ligustica,簡稱意蜂）幼蟲的侵染性以及意蜂幼蟲響應(yīng)N.ceranae脅迫的免疫應(yīng)答,本研究首先在實驗室條件下對意蜂3日齡幼蟲飼喂接種N.ceranae的純化孢子,通過腸道組織的石蠟切片和HE染色技術(shù)研究N.ceranae對意蜂幼蟲及預(yù)蛹的侵染情況;利用實時熒光定量PCR（qRT-PCR）技術(shù)檢測意蜂幼蟲及預(yù)蛹主要免疫基因?qū).ceranae的應(yīng)答水平;進而利用RNA-seq技術(shù)對正常及N.ceranae脅迫的意蜂幼蟲進行深度測序,通過生物信息學(xué)方法深入分析宿主的高表達基因（highly... 

【文章來源】：福建農(nóng)林大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：101 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

N.ceranae孢子的percoll離心純化

圖 2-2 N. ceranae 純化孢子的顯微觀察（400 倍）-2 Microscopic observation of purifiedspores ofN. ceranae (400 times magnif蜜蜂微孢子蟲的 PCR 及 TA 克隆鑒定. ceranae 的總 DNA 作為模板，設(shè)計核糖體小亞基基因特異性，將擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳，可觀察到符合預(yù)期大�。s段。

圖 2-3 PCR 擴增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳 Agarose gel electrophoresis of PCR amplification：泳道 M：DNAmarker；泳道 1：PCR 擴增產(chǎn)后連接 pMD 19T 載體，菌液 PCR 可擴增出泳可見約 300 bp 多和約 3000 bp 的片段，菌液測序，用M13引物進行擴增，將測序結(jié)的核酸序列與 N. ceranae 核糖體小亞基實純化得到的孢子為 N. ceranae。15

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]中華蜜蜂與意大利蜜蜂比較生物學(xué)的研究[D]. 段成鼎.福建農(nóng)林大學(xué) 2003



本文編號：3547186