水稻細(xì)菌性褐條病是影響水稻生產(chǎn)的一種非常重要的病害,危害嚴(yán)重,在國外水稻種植地區(qū)普遍發(fā)生,我國近年來各地陸續(xù)有該病發(fā)生的報(bào)道。水稻細(xì)菌性褐條病的病原菌為燕麥?zhǔn)伤峋帑渷喎NAcidovorax avenae subsp.avenae（Aaa）。本實(shí)驗(yàn)室的前期研究已發(fā)現(xiàn)Aaa菌株RS-1中存在六型分泌系統(tǒng)（T6SS）,且在Aaa的致病過程中起著異常重要的作用;近期本實(shí)驗(yàn)室通過序列比對(duì)等生物信息學(xué)方法發(fā)現(xiàn)Aaa菌株RS-2中也含有25個(gè)T6SS基因,但其致病性比菌株RS-1弱,此時(shí),迫切需要搞清楚T6SS在Aaa菌株RS-2致病中的功能。本研究在通過同源重組法構(gòu)建了菌株RS-2的25個(gè)T6SS基因突變體及7個(gè)相關(guān)回補(bǔ)體的基礎(chǔ)上,測(cè)定和分析它們的致病性、生長(zhǎng)曲線、生物膜形成、游動(dòng)性和效應(yīng)蛋白分泌等毒力相關(guān)表型,結(jié)果發(fā)現(xiàn)pppA,clpB,hcp,dotU,icmF impF,impM和8個(gè)vgrG（1-8）基因突變會(huì)導(dǎo)致菌株RS-2的致病性和Hcp效應(yīng)蛋白的分泌顯著降低,其中致病性降低了 17.47～56.40%,Hcp蛋白分泌減少了 37.78～68.46%,由陽性降至陰性;在培養(yǎng)12、24... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．２水稻細(xì)菌性褐條病菌菌株ＲＳ－１中Ｔ６ＳＳ的組成（Ｉｂｒａｈｉｍ等，２０１２）??－

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文??材料與方（Ｃｈｌｏｒｏｍｙｃｅｔｉｎ－）具有抗性。?????Ｃｒｅａｔｅｄ?ｗｉｔ－?－?Ｇｅｎ＞＊＂??（３０２８）?ＡｆｌＨＩ?Ｘｃｍｌ?（１４８）??

通過目的片段與質(zhì)粒的雙酶切，重組，轉(zhuǎn)化入五．Ｃｏ／／ＤＨ５ａ感受態(tài)細(xì)胞中，在含卡那霉素??（終濃度為５０＾ｇ／ｍｌ）的ＬＢ平板上培養(yǎng)２４ｈ，形成單菌落以后，挑單菌落，用Ｔ６ＳＳ回補(bǔ)基因??目的片段引物進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)增，結(jié)果如圖４．５所示，條帶單一，且大小與圖４．４相同，均與軟??件設(shè)計(jì)的大小相符，進(jìn)一步說明Ｔ６ＳＳ回補(bǔ)基因的目的片段可能已導(dǎo)入轉(zhuǎn)化子中，得到了?７個(gè)??疑似ｐＲＡＤＫ－Ｔ６ＳＳ重組質(zhì)粒。??４０００??２０００??１０００??圖４．５大腸桿菌轉(zhuǎn)化子Ｔ６ＳＳ回補(bǔ)基因目的片段的引物驗(yàn)證??Ｆｉｇ．?４．５?Ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ?ｏｆＥ．?ｃｏｌｉ?ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｎｔｓ?ｗｉｔｈ?Ｔ６ＳＳ?ｓｐｅｃｉｆｉｃ?ｐｒｉｍｅｒｓ??Ｍ：?Ｍａｒｋｅｒ，?１?ｋｂ；?１￣７：?ｐｐｐＡ，?ｉｃｍＦ，?ｈｅｐ，?ｄｏｔＵ，?ｉｍｐＪ，?ｃｌｐＢ，?ｉｍｐＭ??４．３．３?Ｔ６ＳＳ基因回補(bǔ)體的篩選和鑒定??待電擊轉(zhuǎn)化子在含氯霉素（終濃度為５０?ｐｇ／ｍｌ）的ＬＢ平板上長(zhǎng)出單菌落后，先將單菌落在??３６??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]水稻細(xì)菌性褐條病菌致病機(jī)理及其氧脅迫相關(guān)基因簇調(diào)控蛋白TetR的功能分析[D]. 劉賀.浙江大學(xué) 2015

碩士論文
[1]兩種水稻主要病原細(xì)菌噬菌體的分離、鑒定和特征化研究[D]. 王麗.浙江大學(xué) 2016
[2]水稻細(xì)菌性褐條病原的鑒定、全基因組和致病相關(guān)基因的研究[D]. 張國慶.浙江大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3503457