飛蝗是我國(guó)主要的農(nóng)業(yè)害蟲,蝗災(zāi)的爆發(fā)給國(guó)家和社會(huì)造成了巨大的損失。上顎是飛蝗進(jìn)食及為害的主要工具,其表面覆蓋著堅(jiān)硬耐磨的表皮。因此,如果能夠闡明飛蝗上顎堅(jiān)硬表皮形成的機(jī)制,進(jìn)而通過RNA干擾來沉默其中關(guān)鍵基因的表達(dá),降低飛蝗上顎的機(jī)械性能,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)飛蝗的控制。本課題組前期工作已經(jīng)獲得了東亞飛蝗上顎的轉(zhuǎn)錄組及蛋白組數(shù)據(jù)。本論文主要對(duì)其中高豐度表皮蛋白基因的生理功能進(jìn)行了研究,明確了其對(duì)上顎硬度的關(guān)鍵性,為設(shè)計(jì)針對(duì)東亞飛蝗的RNA農(nóng)藥提供了新的思路和候選靶標(biāo)基因。本論文的具體研究?jī)?nèi)容如下:（1）通過轉(zhuǎn)錄組、蛋白組分析,挑選出在東亞飛蝗上顎中高豐度的表皮蛋白基因。通過與東亞飛蝗基因組數(shù)據(jù)庫中的序列進(jìn)行比對(duì),確定目的基因序列,并從自行構(gòu)建的cDNA文庫中成功調(diào)取了目的基因。這四個(gè)基因分別是:35501和30044（表皮蛋白CPR-RR2家族）;39539和30387（類表皮蛋白）。（2）利用實(shí)時(shí)定量PCR對(duì)四個(gè)表皮蛋白基因的轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行分析。就時(shí)期特異性而言,35501基因和30044基因主要在蛻皮前高轉(zhuǎn)錄水平,但35501基因轉(zhuǎn)錄水平明顯高于30044基因。39539基因在蛻皮前后均高轉(zhuǎn)錄... 

【文章來源】：大連理工大學(xué)遼寧省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
1.文獻(xiàn)綜述
    1.1 東亞飛蝗
        1.1.1 東亞飛蝗的特征
        1.1.2 東亞飛蝗的分布和危害
    1.2 昆蟲表皮
        1.2.1 昆蟲表皮的結(jié)構(gòu)與功能
        1.2.2 昆蟲表皮的代謝
    1.3 表皮蛋白
        1.3.1 表皮蛋白分類
        1.3.2 CPR家族
        1.3.3 表皮蛋白基因研究現(xiàn)狀
        1.3.4 飛蝗表皮蛋白研究現(xiàn)狀
    1.4 RNAi技術(shù)
        1.4.1 RNAi特點(diǎn)
        1.4.2 dsRNA導(dǎo)入途徑
        1.4.3 RNAi應(yīng)用
    1.5 選題依據(jù)與研究?jī)?nèi)容
        1.5.1 選題依據(jù)
        1.5.2 研究?jī)?nèi)容
2.東亞飛蝗上顎高轉(zhuǎn)錄水平表皮蛋白序列分析
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.2 東亞飛蝗上顎轉(zhuǎn)錄組和蛋白組分析
        2.2.3 表皮蛋白篩選與序列分析
        2.2.4 東亞飛蝗上顎中RNA的提取
        2.2.5 cDNA合成
        2.2.6 目的基因的調(diào)取與測(cè)序
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 轉(zhuǎn)錄組與蛋白組分析
        2.3.2 目的及基因調(diào)取與驗(yàn)證
    2.4 討論與分析
    2.5 小結(jié)
3 東亞飛蝗上顎表皮蛋白的表達(dá)模式分析
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 不同時(shí)期總RNA提取及c DNA合成
        3.2.3 不同組織RNA提取及c DNA合成
        3.2.4 目的基因時(shí)期表達(dá)特異性檢測(cè)
        3.2.5 目的基因組織表達(dá)特異性檢測(cè)
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 目的基因時(shí)期表達(dá)模式分析
        3.3.2 目的基因組織表達(dá)模式分析
    3.4 討論與分析
    3.5 小結(jié)
4.東亞飛蝗上顎目的蛋白的生理功能分析
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.2 DNA模板制備
        4.2.3 dsRNA合成
        4.2.4 dsRNA體外注射
        4.2.5 宏觀表型觀察
        4.2.6 RNAi基因沉默效果檢測(cè)
        4.2.7 上顎硬度檢測(cè)
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 模板及dsRNA合成
        4.3.2 宏觀表型分析
        4.3.3 基因沉默效果
        4.3.4 上顎表型分析
        4.3.5 上顎硬度分析
    4.4 討論與分析
    4.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]靶向調(diào)控飛蝗表皮代謝相關(guān)基因的miRNA的鑒定與分析[J]. 王艷麗,楊美玲,馬恩波,張建珍.  昆蟲學(xué)報(bào). 2017(03)
[2]中國(guó)歷史蝗區(qū)演化與水系變遷研究回顧與展望[J]. 李鋼,孔冬艷,李豐慶,劉倩,王會(huì)娟.  熱帶地理. 2017(02)
[3]昆蟲表皮蛋白基因研究進(jìn)展[J]. 梁欣,陳斌,喬梁.  昆蟲學(xué)報(bào). 2014(09)
[4]蝗蟲再猖獗的控制與生態(tài)學(xué)治理[J]. 陳永林.  中國(guó)科學(xué)院院刊. 2000(05)
[5]亞非地區(qū)蝗蟲發(fā)生動(dòng)態(tài)分析[J]. 陳永林.  世界農(nóng)業(yè). 1987(01)

碩士論文
[1]昆蟲裂解性多糖單加氧酶的性質(zhì)表征與功能分析[D]. 鄧曉瑞.大連理工大學(xué) 2018



本文編號(hào)：3503206