松墨天牛（Monochamus alternatus Hope）屬于鞘翅目（Coleoptera）,天牛科（Cerambycidae）是危害馬尾松（Pinus massoniana）等松材的重大森林害蟲,是松材線蟲（Bursaphelenchus xylophilus）的主要傳播媒介。近3年來,松墨天牛分子生物學領域的研究從個別基因的克隆發(fā)展到轉錄組研究,為高通量研究基因奠定了基礎;從單純的生物信息學分析發(fā)展到結合生理學、毒理學及化學生態(tài)學等綜合研究,充分展現(xiàn)了分子生物學的研究優(yōu)勢。超氣門蛋白（ultraspiracle,USP）處于昆蟲發(fā)育、變態(tài)及繁殖等過程級聯(lián)調控的開始位置,研究不同目昆蟲USP的結構及功能特點,深入地了解其作用方式及開展應用研究,無論對益蟲生長發(fā)育的調控亦或是對害蟲的防治都有重要的理論和實用價值。本文研究松墨天牛超氣門蛋白cDNA的序列特征、功能等,對于開發(fā)環(huán)境友好型新藥劑和基因調控開關等方面具有重要指導作用。本研究采用RACE方法克隆得到松墨天牛USP基因全場序列,應用RNA干擾（RNA interference,RNAi）方法對其功能進行了研究,同時進行了生物... 

【文章來源】：華南農業(yè)大學廣東省

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

松墨天牛4齡幼蟲總RNA電泳圖

25圖 2 MaUSP 的核苷酸及推導的氨基酸序列Fig.2 Nucleotide and deduced amino acid sequences of MaUSP注：起始密碼子 ATG 以下劃波浪線表示，終止密碼子 TAA 以* 表示，20 個絲氨酸磷酸化位點、14 個蘇氨酸磷酸化位點、4 個酪氨酸磷酸化位點分別以圓形、矩形、三角形表示，2 個糖基化位點以五角星形表示，加尾信號 AATAAA 以雙下劃線表示。使用 DNAMAN 序列分析軟件將測序所得的 3′ RACE 序列和 5′ RACE 序列與從松墨天牛 cDNA 文庫中篩選得到的松墨天牛超氣門蛋白基因片段序列拼接得到如圖 2所示序列。該序列全長為 1583 bp，命名為 MaUSP（GenBank 登陸號：KU587580），其中包含 186 bp 的 5′ 端非編碼區(qū)及 241 bp 的 3′ 端非編碼區(qū)，ORF 為 1155 bp，編碼 384 個氨基酸，包含 12 bp 的 Poly A 尾巴和從第 1547 位至 1552 位的一個特征性序列，即加尾信號 AATAAA。通過 MaUSP 的磷酸化修飾位點預測發(fā)現(xiàn)，Tn 分值＞0.5

的磷酸化位點有：絲氨酸( Ser )磷酸化位點 20 個，蘇氨酸( Thr )磷酸化位點 14 個，酪氨酸( Tyr )磷酸化位點 4 個，共計 38 個磷酸化位點，這些位點相對均勻地分布在整個多肽鏈中。NetOGlye 預測表明，MaUSP 在 256 和 379 氨基酸位點存在 N-糖基化修飾。3.3 USP 基因序列相似性比對

【參考文獻】：
期刊論文
[1]松墨天牛Homothorax基因的鑒定及表達分析[J]. 陳敬祥,劉琪司,林同.  華北農學報. 2017(01)
[2]松墨天牛葡萄糖-6-磷酸異構酶基因克隆及序列分析[J]. 蔡紫玲,陳敬祥,林同.  南方農業(yè)學報. 2016(05)
[3]松墨天�；瘜W感受組織熒光定量PCR內參基因的鑒定與篩選[J]. 馮波,郭前爽,毛必鵬,杜永均.  昆蟲學報. 2016(04)
[4]孟氏隱唇瓢蟲氣味結合蛋白ComOBP1基因的克隆和時空表達[J]. 潘暢,張宇宏,謝佳沁,李浩森,龐虹.  環(huán)境昆蟲學報. 2016(02)
[5]松墨天牛核糖體蛋白（RPS15A）cDNA的克隆及農藥脅迫對其表達的影響[J]. 羅淋淋,蔡紫玲,林同.  西北農林科技大學學報(自然科學版). 2016(02)
[6]松墨天牛包囊蛋白基因的克隆及表達特性分析[J]. 毛珊珊,吳華俊,林同.  中南林業(yè)科技大學學報. 2016(01)
[7]DNA條形碼試劑盒檢測技術在墨天牛鑒定中的應用[J]. 陳夢義,徐梅,錢路,安榆林,郝德君.  南京林業(yè)大學學報(自然科學版). 2015(06)
[8]松墨天牛肌球蛋白輕鏈2基因的鑒定及表達模式[J]. 吳華俊,蔡紫玲,羅淋淋,林同.  華北農學報. 2015(03)
[9]家蠶的蛻皮激素受體和超氣門蛋白在大腸桿菌中的共表達和純化[J]. 唐詩蕊,王濤,王旻.  藥物生物技術. 2015(03)
[10]松墨天牛OBP基因MaltOBP2和MaltOBP6的克隆、序列分析及組織表達譜和原核表達研究[J]. 錢凱,馮波,巫詡亮,勞沖,沈幼蓮,杜永均.  昆蟲學報. 2015(05)

博士論文
[1]擬黑多刺蟻蛻皮激素受體（EcR）和超氣門蛋白（USP）的cDNA測序、mRNA表達及其與雌激素相關受體（ERR）的功能相關性分析[D]. 劉曉明.陜西師范大學 2013
[2]熱休克蛋白同源物Hsc70等5種基因在蛻皮激素信號途徑中的功能及相互作用研究[D]. 鄭薇薇.山東大學 2010

碩士論文
[1]松褐天牛氣味結合蛋白基因的克隆與功能分析[D]. 王娟.華中農業(yè)大學 2015
[2]家蠶蛻皮激素受體和超氣門蛋白在絲腺中的表達特征及其相關功能研究[D]. 杜杰.蘇州大學 2015
[3]松褐天牛OBPs基因克隆與分析[D]. 高雄.華中農業(yè)大學 2014
[4]黃花蒿EβF合成酶基因及麥長管蚜蛻皮素受體基因USP和EcR的克隆和遺傳轉化[D]. 陳紅梅.河北農業(yè)大學 2014
[5]家蠶蛻皮激素受體和超氣門蛋白基因的啟動子分析[D]. 黃明霞.蘇州大學 2014
[6]超氣門蛋白（USP）基因及蛻皮激素受體（EcR）基因對擬黑多刺蟻和黃臉油葫蘆生長發(fā)育調節(jié)功能的研究[D]. 黨亮.陜西師范大學 2014
[7]甜菜夜蛾幼蟲期EcR和USP基因表達模式與功能研究[D]. 劉鵬琰.南京農業(yè)大學 2013
[8]家蠶蛻皮激素受體和超氣門蛋白基因的表達調控研究[D]. 蘇保錦.蘇州大學 2012



本文編號：3463063