從發(fā)生馬鈴薯黑脛病的病薯上分離純化得到馬鈴薯黑脛病菌,根據(jù)柯赫氏法則確定病原菌后并提取該病菌的DN A,用特異性引物Eca1g和Eca2g對(duì)DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增、測(cè)序,最終鑒定為歐文氏菌屬馬鈴薯黑脛亞種（Erwinia carotovora subsp.atroseptica）。將不同濃度黑脛病菌針刺接種于馬鈴薯臍部,觀察發(fā)病情況,并用傳統(tǒng)法和改良法分別提取發(fā)病組織中黑脛病菌DNA,用特異性引物Eca1g和Eca2g進(jìn)行PCR擴(kuò)增來檢驗(yàn)該種薯是否帶有黑脛病菌。具體研究結(jié)果如下:（1）以馬鈴薯黑脛病菌DNA為模板,利用其特異性引物Eca1g和Eca2g,進(jìn)行PCR擴(kuò)增,擴(kuò)增出片段的大小約為750bp。（2）當(dāng)接種濃度小于9× 105cfu/ml時(shí),接種種薯情況與對(duì)照相同,沒有發(fā)病,種薯帶有黑脛病菌但不發(fā)病;當(dāng)接種濃度是1.8×106cfu/ml時(shí),種薯發(fā)病,說明接種濃度大于1.8×106cfu/ml時(shí),馬鈴薯種薯會(huì)發(fā)病并且肉眼可見。（3）傳統(tǒng)法提取種薯黑脛病菌DNA靈敏度只能達(dá)到106cfu/ml,改良法提取種薯黑脛病菌DNA靈敏度可達(dá)到105cfu/ml。兩者選其優(yōu),F日常的生產(chǎn)實(shí)踐中... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：42 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖３平板劃線結(jié)果??Ｆｉｇｕｒｅ３?Ｆｌａｔ?ｌｉｎｅ?ｒｅｓｕｌｔｓ??

２．?１．?３．?１分離菌株的致病性測(cè)定結(jié)果??在馬鈴薯臍部針刺接菌，以無菌水作對(duì)照，１、２、３為三次重復(fù)，如圖??１；經(jīng)過６天后發(fā)病，馬鈴薯臍部切開后腐爛發(fā)臭，如圖２。??ｆ，？?ｆ??圖１接菌試驗(yàn)??Ｆｉｇｕｒｅ?Ｉ?Ｔｈｅ?ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ??圖２致病性測(cè)定結(jié)果??Ｆｉｇｕｒｅ２?Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ?ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ?ｒｃｓｔｉｌｉｓ??２．?１．３．２?病原菌菌落形態(tài)觀察??將病原菌在ＬＢ平板培養(yǎng)基上于２７°Ｃ培養(yǎng)４８ｈ，如圖３，觀察到ＬＢ培??養(yǎng)基上的菌落呈圓形，邊緣整齊，隆起乳白色至淺黃色，半透明或不透明，??質(zhì)地粘稠。??國(guó)??圖３平板劃線結(jié)果??Ｆｉｇｕｒｅ３?Ｆｌａｔ?ｌｉｎｅ?ｒｅｓｕｌｔｓ??

Ｆｉｇｕｒｃ４?Ｇｒａｍ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｒｅｓｕｌｔｓ??２．?１．３．４鞭毛染色結(jié)果??如圖５，菌體顏色呈現(xiàn)深褐色，鞭毛淺褐色，可觀察看到周生幾根鞭毛。??ｆ??圖５鞭毛染色結(jié)果??ＦｉｇｕｒｅＳ?Ｔｈｅ?ｆｌａｇｅｌｌｕｍ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｒｅｓｕｌｔｓ??２．２?常規(guī)ＰＣＲ方法鑒定病原菌??在１９８０年中期，致力于人類遺傳研究的Ｋａｒｙ?Ｍｕｌｌｉｓ等在美國(guó)Ｃｅｔｕｓ??公司建立了聚合酶催化的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｅｔｉｏｎ，?ＰＣＲ）?ｍ］。??隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和突破，ＰＣＲ技術(shù)已得到各個(gè)領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用，例如??微生物檢測(cè)等［７２］。由于該技術(shù)具有較強(qiáng)特性包括靈敏、準(zhǔn)確以及特異性等，??還能進(jìn)行短時(shí)間快速檢測(cè)，因此伴著這些特性，應(yīng)用領(lǐng)域也得到了進(jìn)一步??的擴(kuò)大［７３］。所以使用常規(guī)ＰＣＲ技術(shù)做病原菌的鑒定。??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]馬鈴薯枯萎病發(fā)生特點(diǎn)及防治措施的初步研究[D]. 王曉麗.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
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[4]哈密瓜果斑病菌快速檢測(cè)方法的建立[D]. 回文廣.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2004



本文編號(hào)：3450963