社會性昆蟲白蟻可以采用類似“人痘接種”的主動免疫方式來抵御致病真菌的感染,但是白蟻主動免疫的分子調(diào)控機制并不十分清楚。在黑胸散白蟻Reticulitermes chinensis Snyder的主動免疫過程中,同伴白蟻與直接染菌白蟻接觸1 d后,其體內(nèi)硒蛋白T（selenoprotein T,Sel T）基因的表達量顯著降低（P<0.05）,暗示Sel T基因可能與白蟻主動免疫相關。昆蟲免疫蛋白轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶（transglutaminase,TG）促進血凝塊形成,在白蟻抵御致病菌侵染的免疫過程中可能發(fā)揮重要作用。鑒于此,本文以黑胸散白蟻和金龜子綠僵菌Metarhizium anisopliae（Metchnikoff）Sorokin為研究材料,利用“宿主—病原真菌”系統(tǒng)（直接染菌白蟻和受菌同伴白蟻一起培養(yǎng)接觸）,開展了Sel T與TG基因調(diào)控黑胸散白蟻防御綠僵菌侵染的主動免疫機制研究。主要結果如下:（1）抑制Sel T基因表達量打破黑胸散白蟻主動免疫首先,克隆得到黑胸散白蟻Sel T基因片段572bp,并設計合成ds Sel T注射入白蟻體內(nèi),3d后顯著降低了Sel T基因表達量... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同處理組的白蟻RNA質(zhì)量條帶1~3代表綠僵菌處理組，4代表2000bp的marker，5~7代表Tween80處理組

華中農(nóng)業(yè)大學2020屆碩士研究生學位（畢業(yè)）論文14反向引物（Reverse,10μM）0.5μLddH2O2μLcDNA模板2μL離心后體系在實時熒光定量PCR儀中反應：95oC預熱3min；95oC解鏈10s，60oC退火加延伸30s，共計40個循環(huán)。2.5數(shù)據(jù)分析采用IBMSPSSStatistics20.0統(tǒng)計分析軟件對基因表達數(shù)據(jù)進行分析。首先使用Shapiro-Wilktest檢測數(shù)據(jù)是否符合正態(tài)分布。分析發(fā)現(xiàn)SelT基因表達數(shù)據(jù)與SepSecS基因表達數(shù)據(jù)均不符合正態(tài)分布，因此使用Wilcoxontest法。3結果與分析3.1受菌同伴白蟻SelT基因的表達量如圖2.2所示，與直接染菌白蟻接觸1d后的受菌同伴白蟻體內(nèi)的SelT基因表達量顯著低于0.1%Tween80對照組無菌同伴白蟻的SelT基因表達量（n=6,P=0.028）。圖2.2受菌同伴白蟻體內(nèi)SelT基因的表達量柱形圖數(shù)據(jù)為平均值±標準誤（*,P<0.05;Wilcoxontest）。Fig.2.2ExpressionofSelTgeneinnestmatesoffungus-contaminatedtermitesThebarchartshowsthemean±SEM(*,P<0.05;Wilcoxontest).

SelT和TG基因調(diào)控黑胸散白蟻防御綠僵菌的主動免疫機制153.2受菌同伴白蟻SepSecS基因的表達量如圖2.3所示，與直接染菌白蟻接觸1d后的受菌同伴白蟻體內(nèi)的SepSecS基因表達量與0.1%Tween80對照組無菌同伴白蟻的SepSecS基因表達量相比無顯著差異（n=6,P=0.753）。圖2.3受菌同伴白蟻體內(nèi)SepSecS基因的表達量柱形圖數(shù)據(jù)為平均值±標準誤（Notsignificant;Wilcoxontest）。Fig.2.3ExpressionofSepSecSgeneinnestmatesoffungus-contaminatedtermitesThebarchartshowsthemean±SEM(Notsignificant;Wilcoxontest).4討論已有研究表明，同伴白蟻與直接染菌白蟻接觸1d后，其體內(nèi)游離硒元素的含量顯著降低（趙星穎2017），而硒的生物學作用主要取決于硒蛋白的生理功能（Kvicala1999）。硒蛋白是一類含有硒的蛋白質(zhì)，以非標準氨基酸硒半胱氨酸（Sec）的形式存在。硒半胱氨酸是第21種氨基酸，類似于半胱氨酸（Cys），只是將硫取代為硒（ChappleandGuigó2008）。硒蛋白在生命的各個領域皆可被發(fā)現(xiàn)，例如真核生物、真細菌和真菌（Lobanovetal2009;Marcoetal2019）。研究表明脊椎動物基因組可編碼的硒蛋白基因高達25個（Kryukovetal2003;Castellanoetal2004），無脊椎動物與之相比則少之又少（Castellanoetal2001）。意大利蜜蜂（Apismellifera）和岡比亞按蚊（Anophelesgambiae）僅保留1-3個硒蛋白（Lobanovetal2009）；黑腹果蠅（D.melanogaster）中僅存3種硒蛋白基因，即硒磷酸合成酶（SPS2）、硒蛋白H（SelH）和硒蛋白K（SelK），SPS2參與硒蛋白的生物合成，SelH和SelK似乎涉及抗氧化作用以及胚胎的存活（Castellanoetal2001;Morozovaetal2003;Luetal2006;Dikiyetal2007）。本文在黑胸散白

【參考文獻】：
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本文編號：3369474