大蒜屬于百合科（Lilicacene）蔥屬植物（Alliums）。自然情況下大蒜為多種病毒復(fù)合侵染,主要包括馬鈴薯Y病毒屬病毒,麝香石竹潛隱病毒屬病毒和青蔥X病毒屬病毒。大蒜X病毒（Garlic virus X,GarVX）是導(dǎo)致大蒜病毒病害的重要病原之一,隸屬蔥X病毒屬（Allexivirus）。Gar VX是單鏈正義RNA病毒,由8106個核苷酸組成,除去3’末端poly（A）結(jié)構(gòu)外,具有六個開放閱讀框（Open Reading Frame,ORF）,其中ORF6編碼的15kDa（p15）蛋白推測為一個半胱氨酸富集蛋白（cysteine-rich proteins,CRPs）。據(jù)報道稱,植物病毒編碼的CRPs蛋白多為病毒致病的決定因子,同時許多病毒的CRPs具有沉默抑制作用,但p15具體功能未知。本研究中,我們以GarVX ORF6編碼的p15蛋白為研究對象。構(gòu)建p15蛋白的綠色熒光表達(dá)載體,通過共聚焦顯微鏡觀察顯示p15蛋白定位在細(xì)胞外周、細(xì)胞核和核仁中。馬鈴薯X病毒（Potato virus X,PVX）介導(dǎo)p15蛋白過量表達(dá)（PVX-p15）與PVX-GFP對比能引起本氏煙矮... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

世界上的青蔥屬病毒的分布

圖 1.3 植物抗病毒 RNA 沉默的示意圖Fig. 1.3 Schematic representation of plant antiviral RNA silencin..(Hedil and Kormelink,2016)毒、雙鏈 RNA 病毒和單鏈環(huán)狀 DNA 病毒編碼至少一種 VSR(Cao, Zhou,2005)。這些蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和序列是不同的，并且基于它們對轉(zhuǎn)基因沉默的表面作用，它們可能靶向PTGS / RNAi 過程的不同階段(Brigneti, Voinnet,1998, Dunoyer, Lecellier,2004, Dunoyer,Lecellier,2004, Kasschau and Carrington,1998, Voinnet, Pinto,2015)。近年來，不同沉默抑制子與 RNA 沉默途徑的相互作用已經(jīng)被深入研究。在轉(zhuǎn)基因擬南芥中，許多抑制因子誘導(dǎo)嚴(yán)重的發(fā)育障礙，并且畸形表型與 miRNA-介導(dǎo)的其靶 mRNA 切割的抑制有關(guān)，例如 蕪 菁 花葉 病 毒 (Turnip mosaic virus, TuMV) 的 P1 / HcPro ， 番 茄叢 矮 病 毒(Tombusvirus ，TBSV)的 P19，花生簇病毒(Pecluvirus, PCV)的 P15 和甜菜黃病毒(Closterovirus, BYV)的 P21 (Chapman, Prokhnevsky,2004, Dunoyer, Lecellier,2004, KD,Z,2003)。另一方面，有些抑制子的表達(dá)在植物中不引起表型變化，并且主要抑制沉默信號的短距離或長距離傳播，如馬鈴薯X病毒(Potato virus X, PVX)的P25細(xì)胞間運動蛋白，蕪菁皺縮病毒的 P38 外殼蛋白(TCV，卡莫維病毒)和蘋果褪綠葉斑病毒(Trichovirus,ACLSV) P50 運動蛋白 (MPs)(Bayne, Rakitina,2005, Deleris, Gallego-Bartolome,2006,

圖 2.1 pGEM-T Easy Vector 示意圖Fig. 2.1 Schematic diagram of pGEM-T Easy Vector純化GAPlasmid Mini Kit I(200)說明書操作。平板上挑取單菌落，接種到 5 mL 含有相應(yīng)抗性的 LB 液體培養(yǎng)基-16 h。好的菌液加入到 1.5ml 的 EP 管中，室溫下 10000 rpm 離心 1-2 m紙上幾分鐘，使培養(yǎng)液盡量流盡。0 μl SolutionⅠ(RNase A)，渦旋震蕩，使菌液均勻懸浮。0 μl SolutionⅡ，輕柔的顛倒混勻，靜置 2-5 min。0 μl SolutionⅢ，快速顛倒混勻，至產(chǎn)生白色絮狀沉淀(為蛋白質(zhì)in。取上清到 HiBind Miniprep Column 中，10000 rpm 離心 1 min。液，加入 500 μl Buffer HB，10000 rpm 離心 1 min。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]植物病毒性疾病概述[J]. 逯宇婷.  鄉(xiāng)村科技. 2016(18)



本文編號：3358739