發(fā)布時間：2021-08-04 23:52

　　小麥條銹病是一種嚴重危害我國小麥產(chǎn)量的一類真菌性病害。這種病主要是由條銹菌侵染小麥細胞導致的。在侵染過程中該病原菌主要通過菌絲特化的營養(yǎng)吸收器官-吸器分泌大量的效應蛋白進入小麥宿主細胞,調(diào)節(jié)宿主細胞的免疫反應。這類分泌型小分子蛋白對病原菌的侵染至關(guān)重要。本文通過克隆小麥條銹菌吸器分泌的效應蛋白PST-1178、PST-8713和PST-1374三個基因,利用大腸桿菌原核表達系統(tǒng)表達和純化得到效應蛋白PST-1178、PST-8713和PST-1374,進而使用圓二色譜等方法研究溶液結(jié)構(gòu)的特點。最后,通過核磁共振技術(shù)（NMR）解析效應蛋白的溶液結(jié)構(gòu)。1通過構(gòu)建原核表達載體和分離純化目的蛋白,得到純的效應蛋白。之后,通過質(zhì)譜（MS）和免疫印跡反應（Western blotting）表明目的蛋白表達正確。并且通過SDS-PAGE檢測,目的蛋白純度已經(jīng)達到95%,可以進行之后的結(jié)構(gòu)實驗。2利用圓二色譜和激光粒度儀實驗來研究在溶液狀態(tài)下效應蛋白PST-1178和PST-8713的二級結(jié)構(gòu),結(jié)果發(fā)現(xiàn)效應蛋白PST-1178和PST-8713具有小部分二級結(jié)構(gòu),PST-1178可能是以多聚體形式存在... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

植物與病菌免疫互作中植物免疫的Z字模型（JonesandDangl2006）

圖 1-1 植物與病菌免疫互作中植物免疫的 Z 字模型（Jones and Dangl 2006）Fig.1-1 Z model illustrates the quantitative output of plant immune system（Jones and Dangl 2006）應蛋白的研究進展絲狀真核微生物包括卵菌、稻瘟菌、白粉菌、番茄葉霉菌和亞麻銹菌泌效應蛋白，來修飾和影響宿主的代謝反應，使宿主的甚至喪失免疫宿主體內(nèi)生長、繁殖，從而達到促進侵染。效應蛋白主要通過與它互強病原菌的毒性。目前一般把效應蛋白劃分為兩大類（Koeck et al. 201于宿主細胞間隙的非原質(zhì)體效應蛋白，其與胞外的靶標蛋白和受體結(jié)于細胞內(nèi)的細胞質(zhì)效應蛋白，能夠與細胞內(nèi)靶標互作。

圖 1-3 功能蛋白結(jié)合靶標蛋白前后的結(jié)構(gòu)對比圖（Dyson and Wright 2005）Fig.1-3 Functional protein binding target protein before andafter the structure of the comparison chart（Dyson and Wright 2005）白質(zhì)溶液二級構(gòu)象的研究進展進行蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)測定前，需要得到蛋白質(zhì)是否存在穩(wěn)定的二級結(jié)構(gòu)其他的幾種方法進行檢測，例如：圓二色譜（CD）、動態(tài)光散射(DLS)等（Du et al. 2015; Kelly et al. 2005; Rayleigh 1912; 劉春靜 et al. 2011）。二色譜和動態(tài)光散射二色譜（CD）是最常見探究蛋白質(zhì)構(gòu)象的方法，在圓二色譜光譜中蛋 240 nm 一下，主要是肽鍵和芳香性氨基酸的側(cè)鏈的吸收峰。其中 主要而 在 190nm 附近。而不同的二級結(jié)構(gòu)也有其圓二色譜譜圖的特點。C同鹽濃度、pH、溫度下，蛋白二級結(jié)構(gòu)的變化（Kelly et al. 2005; Zou et a


本文編號：3322637