柑橘黃龍病是世界范圍內(nèi)危害柑橘生產(chǎn)最嚴重的病害之一。由于黃龍病田間癥狀復(fù)雜,常會造成誤判,如何進行準確診斷將是面對實際生產(chǎn)中急需解決的最現(xiàn)實問題。田間有多種黃化表現(xiàn)形式,在我國,通常以葉基部褪綠為典型癥狀,在美國,佛羅里達州則以斑駁葉為判斷依據(jù)。為了闡明基部褪綠葉片和斑駁葉片哪個更具有田間癥狀診斷依據(jù),以及黃龍病在不同癥狀中分布情況,本研究首次選用“紅鼻子果”樹為研究對象,將“紅鼻子果”樹作為黃龍病標準樹,比較柑橘黃龍病在基部褪綠葉片、斑駁葉片以及在不同癥狀葉片中的分布,為暗處理檢測技術(shù)提供更全面的采樣依據(jù),同時為田間診斷提供技術(shù)支持。為了闡明在黑暗條件下不同季節(jié)健康奧林達夏橙葉片與感黃龍病奧林達夏橙葉片淀粉含量的變化以指導(dǎo)田間碘-淀粉法檢測柑橘黃龍病,本研究將“紅鼻子果”樹作為黃龍病標準樹,健康植株采自無毒苗圃,以夏橙葉片為材料,分別進行T=8:00暗處理Oh、24h、48h、72h;T=12:00 暗處理 Oh、24h、48h、72h;T=17:00 暗處理 Oh、24h、48h、72h處理,利用暗處理檢測技術(shù)以及熒光定量PCR檢測技術(shù)鑒定不同暗處理的樣本,同時進行了碘-淀粉法與暗... 

【文章來源】：福建農(nóng)林大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：155 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１柑橘黃龍病癥狀識別??Ｆｉｇ．?１－１?Ｔｙｐｉｃａｌ?ｓｙｍｐｔｏｍｓ?ｏｆ?Ｃｉｔｒｕｓ?Ｈｕａｎｇｌｏｎｇｂｉｎｇ??病樹的樹勢弱，對極端溫度的適應(yīng)性較差［３５］

每個品種柑橘樹３個重復(fù)，每個重復(fù)選擇一棵樹，每棵樹采集基部褪綠葉??片６片和斑駁葉片６片。??采集的葉片以葉片中脈為基準，剪切成左、右半片葉和中脈３部分（圖２－２），??葉片中脈用于實時熒光定量ＰＣＲ檢測。???＇ｌｌ??ｉｉｙ??圖２－２葉片分解圖??Ｆｉｇ．２－２?Ｄｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｌｅａｆ??１．２．２不同癥狀樣本采集??“紅鼻子果”樹５棵，每個季節(jié)采樣１次，采樣時，每棵樹剪取出現(xiàn)黃化??癥狀枝條８個，每個枝條從上至下至少選擇５片葉，將葉片剪下用自來水沖洗干??凈，并拍照記錄，葉片樣品放置于－２０°Ｃ冰箱中保存。??１．２．３柑橘葉片分類??根據(jù)柑橘葉片的黃化表現(xiàn)將葉片分為４類：斑駁類、黃化類、缺素類和其他??癥狀。其中斑駁類包括基部斑駁、典型斑駁、非典型斑駁、輕微斑駁４種；黃化??類包括葉尖黃化、均勻黃化、基部黃化、葉緣黃化、脈間黃化、葉脈黃化、半邊??黃化７種；缺素類包括缺鎂狀、缺鋅狀和缺鐵狀３種；其他癥狀包括蟲害、潰瘍??病、綠島、正常４種（表２－３）。??１７??

Ｉ?ｉ?ｅｂ？：?■■??Ｈ?－?ｊｆｉ」??圖３－１暗處理檢測技術(shù)實驗步驟圖??Ｆｉｇ．３－１?Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ?ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ?ｏｆ?ｄａｒｋ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ??１．２．６暗處理檢測結(jié)果判定標準??葉片用海綿砂塊打磨葉片后，用酒精脫色，再用２％碘酊染色，若呈現(xiàn)成片??的黑色或深藍色則表示此葉片已感染黃龍病，樣品判斷為陽性；若恢復(fù)到葉片原??來顏色或變?yōu)闇\咖啡色，則表明葉片沒有感染黃龍病，樣品判斷為陰性。判斷標??準如圖３－２。??圖３－２暗處理檢測結(jié)果判定標準??Ｆｉｇ．３－２?Ｃｒｉｔｅｒｉａ?ｆｏｒ?ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ?ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ｄａｒｋ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ??注：左側(cè)為陽性樣品檢測結(jié)果圖，右側(cè)為陰性樣品檢測結(jié)果圖??１．２．７數(shù)據(jù)分析??（１）

【參考文獻】：
期刊論文
[1]柑橘黃龍病碘—淀粉法快速檢測技術(shù)優(yōu)化[J]. 王許會,郭洋洋,全金成,張宇宏,陳慈相,邱棟梁,毛潤乾.  福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2017(04)
[2]柑橘黃龍病分子生物學(xué)檢測方法研究進展[J]. 盧乃會,李強有,張曼其,何紅,黃勤知,趙麗宏.  現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技. 2016(12)
[3]柑橘黃龍病癥狀與“Candidatus Liberibacter asiaticus”PCR檢測結(jié)果的相關(guān)性分析[J]. 許美容,陳燕玲,鄧曉玲.  植物病理學(xué)報. 2016(03)
[4]柑橘黃龍病病原的研究進展及病株的簡易鑒定[J]. 黃小耘,田甜.  東南園藝. 2015(06)
[5]柑橘黃龍病研究進展[J]. 程春振,曾繼吾,鐘云,閆化學(xué),姜波,鐘廣炎.  園藝學(xué)報. 2013(09)
[6]柑橘黃龍病診斷方法的研究進展[J]. 高玉霞,盧占軍,劉志芳,鐘八蓮.  贛南師范學(xué)院學(xué)報. 2013(03)
[7]三種分子檢測體系的比較及柑橘果園黃龍病監(jiān)測[J]. 林亞玉,殷幼平,陳世欽,王中康.  植物保護學(xué)報. 2012(06)
[8]柑橘黃龍病LAMP快速檢測方法的建立及應(yīng)用[J]. 黃麗,蘇華楠,唐科志,黃愛軍,周常勇,李中安.  果樹學(xué)報. 2012(06)
[9]柑橘黃龍病檢測方法研究進展[J]. 黃偉鋒,洪添勝,吳偉斌,Mwape.  廣東農(nóng)業(yè)科學(xué). 2012(16)
[10]柑橘黃龍病與柑橘木虱在我國發(fā)生北界調(diào)查[J]. 熊紅利,林云彪,項宇,劉慧,李瀟楠.  植物檢疫. 2011(04)

博士論文
[1]中國柑橘黃龍病病原調(diào)查、種群遺傳分化及其原噬菌體溶菌酶蛋白原核表達[D]. 蘇華楠.西南大學(xué) 2013
[2]Candidatus liberibacter asiaticus誘導(dǎo)的柑橘轉(zhuǎn)錄組學(xué)及蛋白組學(xué)研究[D]. 鐘云.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012

碩士論文
[1]黃龍病菌對寄主植物淀粉代謝相關(guān)酶的影響及檢測技術(shù)研究[D]. 霍斐爾.華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]湖南柑橘黃龍病檢測及DNA片段克隆[D]. 王春梅.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



本文編號：3322329