近年來(lái),番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt orthotospovirus,TSWV）在多地發(fā)生嚴(yán)重危害。采用小RNA深度測(cè)序和RT-PCR相結(jié)合的方法對(duì)采自黑龍江省的番茄病毒病樣品中病毒進(jìn)行了鑒定。提取番茄樣品的RNA并構(gòu)建小RNA文庫(kù)進(jìn)行測(cè)序,數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)比對(duì)至TSWV基因組的reads數(shù)占比對(duì)到病毒核酸總reads數(shù)的92.64%,表明侵染此番茄樣品的病原物可能是TSWV。利用RT-PCR方法進(jìn)一步確定侵染此番茄樣品的病毒為T(mén)SWV,將其命名為T(mén)SWV-HLJ1。對(duì)TSWV-HLJ1的全序列進(jìn)行分析并構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù),結(jié)果表明TSWV-HLJ1與TSWV云南甜椒分離物YNgp的親緣關(guān)系最近。介體傳毒試驗(yàn)表明,西花薊馬可將TSWV-HLJ1傳播感染健康寄主植物,且健康薊馬對(duì)帶毒辣椒的選擇性更強(qiáng)。汁液摩擦試驗(yàn)表明,TSWV黑龍江分離物能夠侵染本氏煙、辣椒和番茄。這是我國(guó)首次在黑龍江省報(bào)道TSWV。2016年,我們?cè)诤Ｄ习l(fā)現(xiàn)了呈嚴(yán)重斑駁、皺縮癥狀的番茄植株,利用Dot-ELISA和RT-PCR技術(shù)相結(jié)合的方法對(duì)病原進(jìn)行鑒定。Dot-ELISA結(jié)果顯示,感病番茄樣品的汁液... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：78 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

疑似感病的番茄樣品癥狀

士學(xué)位論文 第二章 黑龍江省番茄斑萎病小 RNA 高通量測(cè)序結(jié)果及數(shù)據(jù)分析提取番茄樣品的的總 RNA，送到北京諾禾致源生物公司小RNA深度測(cè)序共得到14 800 277條reads，經(jīng)質(zhì)量控制后s 占總 reads 數(shù)量的 97.43%，其中 unique reads 3 258 792上 TSWV 三條鏈的 reads 數(shù)占比對(duì)到病毒數(shù)據(jù)庫(kù)的總 rea到參考病毒序列的小 RNA 進(jìn)行分析，結(jié)果顯示番茄樣品在 20～24 nt,其中 21 nt 和 22 nt 大小的小 RNA 占得比例5.43%（圖 2.2）。

圖 2.3 不同 TSWV 分離物全基因組核苷酸序列的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。a，b 和 c 分別為 TSWV 分離物的 RNA L、RNA M、RNA S 全核苷酸序列的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)Fig.2.3 Phylogenetic tree based on full length genome nucleotide sequences of different isolates of TSWV. a, b and c arethe phylogenetic tree based on TSWV RNA L, RNA M and RNA S nucleotide sequences, respective2.3.4 西花薊馬對(duì) TSWV-HLJ1 的傳播為了探究西花薊馬能否傳播 TSWV-HLJ1，將 6 株健康的番茄和辣椒植株分別與 30 頭飼毒的西花薊馬成蟲(chóng)一同置于網(wǎng)籠中，以健康薊馬取食的植株作為對(duì)照，2 周后發(fā)現(xiàn)，飼毒薊馬取食的番茄和辣椒植株呈現(xiàn)黃化、壞死等明顯的病毒侵染癥狀（2.4a）。單株提取番茄和辣椒樣品的 RNA，利用 TSWV-HLJ1 的特異性引物 TSWV-M-5F/TSWV-M-3R 對(duì)番茄和辣椒植株進(jìn)行 RT-PCR 檢測(cè)，12 株植株均擴(kuò)增到目的條帶，而陰性對(duì)照中未檢測(cè)得到任何條帶（圖 2.4b）。以上結(jié)果證明，西花薊馬可將 TSWV- HLJ1 傳播感染健康寄主植物。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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