近年來(lái),在冀東和冀北板栗主產(chǎn)區(qū)發(fā)生了一種俗稱“板栗小葉病”的病害,可導(dǎo)致板栗大量減產(chǎn),且傳播速度快,嚴(yán)重威脅著板栗產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。本研究試圖明確“板栗小葉病”病原菌及分類地位,探索一套有效的綜合防控技術(shù)。通過(guò)巢式PCR擴(kuò)增、克隆、測(cè)序后進(jìn)行Blastn序列比對(duì)分析,所獲得的植原體16S r DNA序列與北京懷柔區(qū)板栗植原體Candidatus Phytoplasma castaneae CnYC（EU599362）和韓國(guó)板栗植原體Ca.P.castaneae（AB054986）的相似度分別為99.44%和99.60%。利用透射電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)圓形或近圓形植原體存在于枝和葉的細(xì)胞中,大小為0.1-0.7μm。結(jié)合形態(tài)學(xué)鑒定和分子生物學(xué)鑒定顯示:“板栗小葉病”病原菌為Ca.P.castaneae,冀東和冀北地區(qū)發(fā)生的“板栗小葉病”為板栗黃化皺縮�。–hinese chestnut Yellow Crinkle,CnYC）�；�16S r DNA序列的虛擬RFLP分析表明“板栗小葉病”病原菌Ca.P.castaneae屬于16Sr XIX-A亞組,菌株編號(hào)為CnYC-Hebei。利用植原體... 

【文章來(lái)源】：河北科技師范學(xué)院河北省

【文章頁(yè)數(shù)】：58 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

“板栗小葉病”各時(shí)期癥狀A(yù)發(fā)病植株B健康植株Fig.2-1Symptomsof"Smallleafofchestnut"AisthediseasedplantandBisthehealthyplant成熟期A1A2B1B2

將所提取DNA濃度統(tǒng)一稀釋到100μg/mL作為模板，利用特異性引物R16mF2/R16mR1進(jìn)行第一輪PCR擴(kuò)增，以第一輪產(chǎn)物稀釋20倍后作為巢式PCR擴(kuò)增的模板，用R16F2n/R16R2進(jìn)行巢式PCR，通過(guò)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)其擴(kuò)增產(chǎn)物特異性，得到約1.2kb的擴(kuò)增片段，與預(yù)期片段大小相符（圖2-3）。而陰性對(duì)照未擴(kuò)增出特異性片段。所得PCR產(chǎn)物送生工生物工程（上海）股份有限公司測(cè)序，獲得部分16SrDNA序列，需進(jìn)一步克攏圖2-2基因組DNA電泳檢測(cè)Fig.2-2GelelectrophoresisofgenomicDNA2000bp1000bpM12345DEEHL2000bp1000bp圖2-316SrDNA序列PCR擴(kuò)增產(chǎn)物凝膠電泳M：DL2000Marker；1：成熟期發(fā)病葉片；2：成熟期發(fā)病枝條；3：落葉前發(fā)病葉片；4：落葉后發(fā)病枝條；5：健康植株（陰性對(duì)照）；Fig.2-3GelelectrophoresisofPCRamplificationproductsof16SrDNAM:DL2000marker;1:Theresultsshowedthattherewerethreetypesofdiseasedleavesinmaturestage;2:diseasedbranchesatmaturestage;3:diseasedleavesbeforedefoliation;4:diseasedbranchesafterdefoliation;5:healthyplants(negativecontrol);

，A260/A280在1.7-2.2，可以進(jìn)行巢式PCR檢測(cè)。這表明所提取基因組DNA的質(zhì)量可以滿足PCR要求。2.2.2.216SrDNA巢式PCR檢測(cè)將所提取DNA濃度統(tǒng)一稀釋到100μg/mL作為模板，利用特異性引物R16mF2/R16mR1進(jìn)行第一輪PCR擴(kuò)增，以第一輪產(chǎn)物稀釋20倍后作為巢式PCR擴(kuò)增的模板，用R16F2n/R16R2進(jìn)行巢式PCR，通過(guò)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)其擴(kuò)增產(chǎn)物特異性，得到約1.2kb的擴(kuò)增片段，與預(yù)期片段大小相符（圖2-3）。而陰性對(duì)照未擴(kuò)增出特異性片段。所得PCR產(chǎn)物送生工生物工程（上海）股份有限公司測(cè)序，獲得部分16SrDNA序列，需進(jìn)一步克攏圖2-2基因組DNA電泳檢測(cè)Fig.2-2GelelectrophoresisofgenomicDNA2000bp1000bpM12345DEEHL2000bp1000bp圖2-316SrDNA序列PCR擴(kuò)增產(chǎn)物凝膠電泳M：DL2000Marker；1：成熟期發(fā)病葉片；2：成熟期發(fā)病枝條；3：落葉前發(fā)病葉片；4：落葉后發(fā)病枝條；5：健康植株（陰性對(duì)照）；Fig.2-3GelelectrophoresisofPCRamplificationproductsof16SrDNAM:DL2000marker;1:Theresultsshowedthattherewerethreetypesofdiseasedleavesinmaturestage;2:diseasedbranchesatmaturestage;3:diseasedleavesbeforedefoliation;4:diseasedbranchesafterdefoliation;5:healthyplants(negativecontrol);

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3277748