發(fā)布時間：2021-07-10 05:50

　　昆蟲病原真菌主要以孢子作為侵染單元感染昆蟲,產(chǎn)孢量和孢子質(zhì)量是其作為生物農(nóng)藥在生產(chǎn)應(yīng)用上的重要參數(shù)。絲狀真菌一般有兩種產(chǎn)孢方式:由菌絲在頂端或側(cè)面分化形成分生孢子的正常產(chǎn)孢方式;在抗逆境條件下,跨過菌絲階段直接形成分生孢子的微循環(huán)產(chǎn)孢方式。在絲狀真菌中對正常產(chǎn)孢研究的相對要深入,而對微循環(huán)產(chǎn)孢研究尚少�；染G僵菌（Metarhizium acridum）能夠被誘導(dǎo)微循環(huán)產(chǎn)孢,并且產(chǎn)生的分生孢子具有數(shù)量多、產(chǎn)孢速度快、孢子大小均一、抗逆性強(qiáng)等。因此,研究微循環(huán)產(chǎn)孢的調(diào)控機(jī)制可為改良?xì)⑾x真菌提供理論依據(jù)和新的技術(shù)途徑。本研究發(fā)現(xiàn)蝗綠僵菌同源異型盒基因MaH1的cDNA全長1863bp,編碼620個氨基酸,并通過生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)其具有同源異型盒典型的180bp的保守結(jié)構(gòu)域和“Helix-Turn-Helix”結(jié)構(gòu);通過表達(dá)模式分析發(fā)現(xiàn)MaH1在產(chǎn)孢時期表達(dá)量最高。該研究通過構(gòu)建同源異型盒基因（MaH1）缺失菌株及回復(fù)菌株,研究了MaH1在蝗綠僵菌中的功能,結(jié)果表明相對于野生型與回復(fù)菌株,發(fā)現(xiàn)MaH1缺失后蝗綠僵菌孢子萌發(fā)中時提前1.5h;在正常培養(yǎng)條件下,蝗綠僵菌中同源盒基因MaH1缺失后產(chǎn)... 

【文章來源】：重慶大學(xué)重慶市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

MaH1的生物信息學(xué)分析及基因結(jié)構(gòu)圖

圖 2.2 MaH1 蛋白與其他同源盒蛋白之間的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹構(gòu)建與保守結(jié)構(gòu)域序列比對（A）MaH1 系統(tǒng)發(fā)育樹;（B）不同物種間 MaH1 蛋白同源比對及保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測，MaH1 蛋白有典型的保守結(jié)構(gòu)域：螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋；（C）通過 SMART 軟件預(yù)測蝗綠僵菌中的同源異型盒基因的二級結(jié)構(gòu)模式圖。Fig. 2.2 Phylogenetic analysis and homeodomain sequence of MaH1 according to amino acidsequence aligment.(A) Phylogenetic analysis of MaH1 with MEGA 4.0. Ⅰrepresentative typeⅠ: the homeodomainlocate in N-terminal, Ⅱrepresentative typeⅡ: contain special construction except homeodomain，Ⅲrepresentative typeⅢ：the homeodomain locate in C-terminal. The homeobox of Saccharomycescerevisiae：MATα1(NP_009867.1), MATα2(NP_009866.1), Yox1p(NP_013685.1)，Yhp1p(NP_010739.3)，Tos8p(NP_011419.1), PHO2p(NP_010177.1)，PHO4p(NP_116692.1)；Thehomeobox of Magnaporthe oryzae: HTF1(XP_003718936.1), HTF2(XP_003714728.1),HTF3(XP_003712331.1), HTF4(XP_003717301.1), HTF5(XP_003711331.1),HTF6(XP_003710061.1), PTH12(XP_003717306.1); The homeobox of setosphaeria turcica:

重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文2.3.2 MaH1 敲除和回復(fù)載體的構(gòu)建利用同源重組的原理，設(shè)計(jì)引物MaH1-LF/LR，MaH1-RF/RR擴(kuò)增MaH1 的左右臂片段，并成功構(gòu)建PK2-PB-MaH1/LR載體，將蝗綠僵菌中的MaH1 的2044bp全長序列替換為篩選標(biāo)記Bar基因，完成敲除載體的構(gòu)建（Fig.2.3 A）。同時，克隆MaH1的全長序列，利用Sur作為篩選標(biāo)記，完成回復(fù)載體的構(gòu)建（Fig.2.3 A），并設(shè)計(jì)合適的酶切位點(diǎn)，利用StuI，BamHI兩種酶將大量提取的轉(zhuǎn)化子基因組分別進(jìn)行酶切，經(jīng)過southern blot實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證敲除和回復(fù)轉(zhuǎn)化子，結(jié)果顯示W(wǎng)T菌株基因組中中檢測得到一條2100 bp的條帶，在敲除突變體中，由于Bar基因成功替代掉了MaHI序列，所以得到的是1030 bp的條帶，而回復(fù)突變體由于是轉(zhuǎn)化到ΔMaH1菌株中的，所以檢測到如圖所示的2100bp和1030 bp兩條帶（Fig.2.3 B），由此可說明獲得的敲除和回復(fù)轉(zhuǎn)化子都是正確的。

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碩士論文
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本文編號：3275315