煙草在我國是重要的經(jīng)濟(jì)作物之一,種植煙草的主要目的是收獲葉片,通過工業(yè)加工制成各種煙制品,滿足消費(fèi)者需求。因此,煙草種質(zhì)的差異,直接影響著成品煙制品的品質(zhì)。與質(zhì)量好的煙制品相比,質(zhì)量差的煙制品首先在口感上大打折扣,其次質(zhì)量差的煙制品中焦油及尼古丁等含量比較多,這會對肺部造成更大的影響。煙草病毒病是全世界煙草栽培區(qū)普遍存在的煙草病害之一,煙草病毒病的種類眾多,分布也比較廣。自20世紀(jì)50年代以來,煙草病毒病在世界各地開始發(fā)生危害,給煙草生產(chǎn)造成了巨大的影響。馬鈴薯PVY病毒是馬鈴薯Y病毒組（potyvirus）中的一種病毒,PVY病毒可侵染多種植物,其中以茄科、藜科和豆科植物受害最重。煙草馬鈴薯Y病毒病就是由馬鈴薯Y病毒（PVY）侵染煙草引起的一種系統(tǒng)性病害,該病毒病又稱“脈壞死病”、“脈帶病”等,感染該病毒的株系一般表現(xiàn)出花葉、壞死和卷葉三種癥狀。早期感染該病毒會導(dǎo)致煙草絕產(chǎn)絕收,近收獲期感染的煙草,會嚴(yán)重影響烤煙品質(zhì)。為了從植物基因組中發(fā)掘更多的抗PVY病毒基因用于植物抗病理論研究與育種應(yīng)用,前期實驗已對煙草感染PVY病毒后的轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行了測序與分析,發(fā)現(xiàn)了一個受PVY誘導(dǎo)顯著上調(diào)表達(dá)... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１?ＴＡＺ結(jié)構(gòu)域??Ｆｉｇｕｒｅ?１－１?ＴＡＺ?ｄｏｍａｉｎ??

栽培品種“Ｋ３２６”中沉默Ｍ５７７，與對照相比，Ｍ５７７基因沉默煙草對ＰＶＹＮ?（ＰＶＹ葉脈壞??死株系）的抗性明顯減弱，表現(xiàn)為發(fā)病時間早，癥狀加重，煙草葉脈不僅壞死區(qū)域增大，而??且壞死區(qū)域還向葉肉區(qū)域延伸，結(jié)果如圖１－２所示。??龜＿??多??ＮｔＢＴｌ－ＳＨｅｎｃｅｉｌ?Ｍｏｃｋ??圖１－２Ｍ５７７基因沉默煙草與對照接種ＰＶＹＮｇ的癥狀??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ｔｈｅ?ｓｙｍｐｔｏｍｓ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＮｔＢＴｌ?ｇｅｎｅ?ｉｎ?Ｔｏｂａｃｃｏ?ｗｅｒｅ?ｓｉｌｅｎｃｅｄ??同時，為了研究其他植物中的ＢＴ１基因是否具有類似的功能，我們利用煙草脆裂病毒??（Ｔｏｂａｃｃｏ?ｒａｔｔｌｅ?ｖｉｒｕｓ，ＴＲＶ）介導(dǎo)的基因沉默載體，在本氏煙（Ｍｃｏ／—ａ？訓(xùn)（３）中沉??默?７Ｗ５７７?的同源基因?Ｍ？＿Ｓ７７?（Ｍｅ如如?ＢＴＢ?ａｎｄ?ＴＡＺ?ｄｏｍａｉｎ?ｐｒｏｔｅｉｎ?１），得到??相同的結(jié)果，即腸５７７基因沉默后本氏煙對ＰＶＹ的抗性明顯減弱，表現(xiàn)為花葉和卷曲癥狀??加重，實驗結(jié)果如圖１－３所示。??５??

２．１．１菌株與質(zhì)粒??實驗所用農(nóng)桿菌菌株為ＥＨＡ１０５，?Ｍ５７７基因?qū)煵莸倪z傳轉(zhuǎn)化的載體圖譜為ｐＢＨＴ－００５??（圖２－１），表達(dá)載體構(gòu)建圖譜為ｐＢＨＴ－ＢＴｌ?（圖２－２）．??Ｔｎｏｓ?Ｐ３５Ｓ??ＮｔＢＴ１??丨，Ｂ?爹一。ＢＨＴ－ＢＴｌ?「‘Ｗ??１?１４０００?ｂｐ?Ｔｎｏｓ??ＮＰＴ?ＩＩ?／??圖２－１載體ｐＢＨＴ－００５圖譜?圖２－２?ｐＢＨＴ－ＢＴｌ載體構(gòu)建??Ｆｉｇｕｒｅ?２－１?Ｍａｐ?ｏｆ?ｖｅｃｔｏｒ?ｐＢＨＴ－００５?Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｍａｐ?ｏｆ?ｖｅｃｔｏｒ?ｐＢＨＴ－ＢＴｌ??２．１．２植物與病毒材料??實驗材料為煙草（７ＷＣ〇汾，品種為煙草Ｋ３２６，由貴州煙草研宄所提供；馬??鈴薯Ｙ病毒脈壞死株系（ＰＹＶＮ）均由貴州省煙草科學(xué)研究院保存。??２．１．３培養(yǎng)基??ＬＢ培養(yǎng)基和ＹＥＢ培養(yǎng)基分別用于培養(yǎng)大腸桿菌和農(nóng)桿菌，具體配方由本實驗室提供；??發(fā)芽培養(yǎng)基：１／８?ＭＳ，ｐＨ?５．８，?０．８％瓊脂；??分化培養(yǎng)基（用于預(yù)培養(yǎng)和共培養(yǎng)）？．?ＭＳ＋１．０ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋０．１ｍｇ／ＬＮＡＡ，?ｐＨ５．８，?０．７５％??瓊脂；??篩選培養(yǎng)基：分化培養(yǎng)基＋Ｋｍ＋羧芐青霉素鈉；??生根培養(yǎng)基：１／２?ＭＳ，?ｐＨ?５．８，?０．７％瓊脂；??ＭＳ?鹽采購于?ＰｈｙｔｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ?Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ?公司。??８??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]從轉(zhuǎn)基因技術(shù)角度談轉(zhuǎn)基因植物的安全性[J]. 葉興國,杜麗璞.  中國種業(yè). 2016(09)
[2]生物防治在我國煙草病蟲害防治上的應(yīng)用[J]. 林兵.  湖南農(nóng)機(jī). 2014(12)
[3]植物病毒病害與化學(xué)防治[J]. 陳亮,劉君麗.  農(nóng)藥. 2013(11)
[4]抗病毒轉(zhuǎn)基因煙草研究進(jìn)展[J]. 趙文軍,馮瑜,楊繼周,田育天,徐益群.  云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)). 2013(05)
[5]煙草花葉病毒病發(fā)生及防治研究進(jìn)展[J]. 周建國,肖啟明,劉雙清,周志成,唐前君.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2013(01)
[6]烤煙漂浮育苗中煙草普通花葉病毒病的傳播規(guī)律[J]. 張崑,胡寧貴,朱峻,劉學(xué)輝,張海,范成平,左銳.  貴州農(nóng)業(yè)科學(xué). 2012(12)
[7]貴州煙草蚜傳病毒�。≒VY、CMV）發(fā)生規(guī)律及其預(yù)測模型的初步研究[J]. 商勝華,孟建玉,羅玉英,羅會斌,徐語,李忠俊.  植物保護(hù). 2012(05)
[8]抗旱相關(guān)基因在煙草中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 趙文軍,楊繼周,胡保文,常劍.  生物技術(shù)進(jìn)展. 2012(04)
[9]中國煙草品種資源的研究現(xiàn)狀與展望[J]. 蔡長春,馮吉,周永碧.  湖北農(nóng)業(yè)科學(xué). 2012(13)
[10]我國煙草病毒病的發(fā)生及綜合防治研究進(jìn)展[J]. 彭曙光.  江西農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2011(01)

碩士論文
[1]水稻轉(zhuǎn)錄因子BTB/TAZ抗病功能的RNAi分析[D]. 付月靈.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2010
[2]滲透脅迫相關(guān)基因?qū)煵莸倪z傳轉(zhuǎn)化及基因功能的研究[D]. 齊巖.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005



本文編號：3269974