由野油菜黃單胞菌錦葵致病變種（Xanthomonascampestrispv.malvacearum,Xcm）侵染引起棉花角斑病在歷史上危害較輕,是一種棉花次要病害,棉花角斑病菌的致病機制研究較少。近年來,由于海島棉品種的推廣和氣候條件的變化,棉花角斑病危害逐年加重。因此,研究Xcm的致病機制,對于制定高效的防治措施具有重要價值。ClpA是一種保守存在的細菌內(nèi)蛋白質(zhì)量控制因子,通過水解ATP來推動細胞內(nèi)異常蛋白的降解,ClpA在病菌Xcm中的作用尚未見報道。前期研究中,我們證明了 ClpA參與Xcm對于棉花的致病性,但是受ClpA調(diào)控的致病因子類型和代謝途徑有待闡明。本研究通過敲除Xcm野生型和△clpA突變體的5個差異表達蛋白的編碼基因,測定野生型與缺陷型菌株的表型,在此基礎(chǔ)上,解析ClpA對于Xcm的調(diào)控作用。利用生物信息學方法比對前期蛋白質(zhì)組學方法測定出Xcm野生型和△clpA突變體的差異表達蛋白的部分氨基酸序列,鑒定出5個差異表達蛋白。它們分別是酮戊二酸半醛脫氫酶（ketoglutarate semialdehyde dehydrogenase,KsdD）,青霉素結(jié)合蛋白（pe... 

【文章來源】：河南大學河南省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－１．?５個基因編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)域??Ｆｉｇｕｒｅ３－１．?Ｔｈｅ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｄｏｍａｉｎｓ?ｅｎｃｏｄｅｄ?ｂｙ?ｔｈｅ?ｆｉｖｅ?ｇｅｎｅｓ??

取驗證正確的ｐＫ１８－ｆａｃ／Ｄ?ｕｐ－ｄｏｗｎ—ｃｏ／／?ｐｉｒ丨１６質(zhì)粒２ｊ＿ｉＬ，電擊轉(zhuǎn)化至??ｃｏ／／Ｓ１７－１中，涂布Ｋｍ抗性平板。提取板上長出的單菌落的質(zhì)粒，分別進行ＰＣＲ??擴增驗證和酶切驗證，得到的結(jié)果和預想的結(jié)果相符合（如圖３－３）。??３．２．４突變株的篩選??（１）

??圖３－３？目的基因敲除載體酶切驗證結(jié)果??Ｆｉｇｕｒｅ３－３．?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｔｗｏ?ｅｎｚｙｍｅｓ?ｄｉｇｅｓｔ?ｋｎｏｃｋｏｕｔ?ｖｅｃｔｏｒｓ?ｐｌａｓｍｉｄ??注：Ｍ代表Ｍａｒｋｅｒ，?１代表擴增出的上下游連接片段，２代表雙酶切后的敲除載體，３??代表用同樣的酶進行雙酶切后的ｐＫｌ８載體。Ａ代表敲除載體，Ｂ代表；敲除載體，??Ｃ代表電敲除載體，Ｄ代表／ｐｅｒ敲除載體，Ｅ代表敲除載體。??（２）?電擊轉(zhuǎn)化ＣＷＳ１７－１??取驗證正確的ｐＫ１８－ｆａｃ／Ｄ?ｕｐ－ｄｏｗｎ—ｃｏ／／?ｐｉｒ丨１６質(zhì)粒２ｊ＿ｉＬ，電擊轉(zhuǎn)化至??ｃｏ／／Ｓ１７－１中，涂布Ｋｍ抗性平板。提取板上長出的單菌落的質(zhì)粒，分別進行ＰＣＲ??擴增驗證和酶切驗證，得到的結(jié)果和預想的結(jié)果相符合（如圖３－３）。??３．２．４突變株的篩選??（１）

【參考文獻】：
期刊論文
[1]中國棉花生理病害研究概況[J]. 張戰(zhàn)備,段國琪,張一白,張慧杰,張國強,王艷萍,王丹.  山西農(nóng)業(yè)科學. 2015(02)
[2]花生熱激蛋白AhHSP70與熱激因子AhHSF基因的克隆及表達分析[J]. 李翠,侯蕾,任麗,張燁,鄭奕雄,王興軍.  山東農(nóng)業(yè)科學. 2015(04)
[3]細菌群體感應(yīng)研究進展[J]. 許玉彬,張穎,王淼,王少偉,王剛.  河南農(nóng)業(yè)科學. 2013(12)
[4]如何識別與防治棉花角斑病?[J]. 王迪軒,龍霞.  農(nóng)藥市場信息. 2013(16)
[5]細菌雙組分系統(tǒng)的研究進展[J]. 郝艷華,張維,陳明.  中國農(nóng)業(yè)科技導報. 2012(02)
[6]棉花角斑病的發(fā)生與防治[J]. 張秀閣.  江西棉花. 2009(05)
[7]棉角斑病對棉花苗、蕾期危害的研究[J]. 張家清,張大業(yè).  云南農(nóng)業(yè)大學學報. 1992(04)
[8]著名植物病理學微生物學家——俞大紱[J]. 顏耀祖.  農(nóng)業(yè)科技通訊. 1989(03)

碩士論文
[1]棉花角斑病菌hpaXm基因敲除與互補載體構(gòu)建[D]. 王慕瑾.海南大學 2014



本文編號：3264283