蛋白質(zhì)組學(xué)是研究生物機(jī)體內(nèi)在變化,以及蛋白質(zhì)和相關(guān)基因功能的重要手段。我們通過這項(xiàng)技術(shù)可以了解病原體感染的宿主體內(nèi)免疫系統(tǒng)調(diào)控,代謝通路調(diào)節(jié)等一些系列機(jī)體的應(yīng)激變化。當(dāng)宿主被外界病原微生物感染時(shí),其體液免疫和細(xì)胞免疫會(huì)發(fā)生相應(yīng)的免疫應(yīng)答反應(yīng),主要原因是參與免疫調(diào)控的相關(guān)蛋白表達(dá)量發(fā)生了變化。因此,宿主感染病原體后,研究免疫相關(guān)蛋白的調(diào)控對(duì)于探究微生物致病機(jī)制和宿主免疫調(diào)控機(jī)理非常重要。在這些相關(guān)蛋白中有些會(huì)涉及到宿主作為生物反應(yīng)器對(duì)大型哺乳類動(dòng)物的過敏性炎癥反應(yīng)中,而有些則是宿主能夠有效預(yù)防病原微生物的有利手段,但是極個(gè)別的蛋白也能夠參與到外界病原對(duì)宿主的感染過程中,從而提高病原的危害性。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用三種不同的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),對(duì)家蠶在BmNPV感染后免疫相關(guān)蛋白和基因的調(diào)控進(jìn)行了深入研究。1.雙向電泳技術(shù)優(yōu)化體系建立本次實(shí)驗(yàn)對(duì)采用四種不同的純化以及蛋白提取方法,3種不同聚焦時(shí)間,兩種考馬斯亮藍(lán)染色法和膠條PH值以及平衡時(shí)間對(duì)家蠶蠶蛹雙向電泳結(jié)果的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,用于TCA-丙酮進(jìn)行研磨后過夜沉降提取的蛋白效率最高,獲得的蛋白點(diǎn)最多,8000v,80000vh時(shí)蛋白縱橫條帶較少,且蛋白... 

【文章來(lái)源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁(yè)數(shù)】：112 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

家蠶蠶蛹蛋白提取方法

圖 A 圖 B 圖 C 圖 D圖2.1家蠶蠶蛹蛋白提取方法Fig.2.1 Extraction methodA-丙酮過夜沉降法 圖B：TCA-丙酮蛋白純化試劑圖C：研磨樣本離心分層去脂法 圖D：TCA-丙酮研-acetone over night settlement method Fig.B:TCA-acetone and 2d-knding sample and centrifugation remove the fats Fig.D:TCA-acetone grindPDquest 結(jié)果顯示， 如圖 A 至圖 B 的蛋白點(diǎn)依次為 72，108，13部分明顯看到大量的橫縱條紋，蛋白點(diǎn)不明顯且拖尾嚴(yán)重，說(shuō)明等電聚焦過程中升壓過慢，沒有完全聚焦。而圖 B 中蛋白點(diǎn)少于圖程種蛋白有損失。圖 C 和圖 D 在蛋白點(diǎn)數(shù)量差距不大，但圖 C 多，不利于后期質(zhì)譜。綜合表明圖 D 的方法效率最高。焦時(shí)間后的蛋白圖譜結(jié)果(圖 2.2 其他條件相同，膠條 pH:3-10)

2.3 不同考馬斯亮藍(lán)染色法后的蛋白圖譜結(jié)果（圖 2.3 其他條件相同，膠條 pH:3-10）圖 A 圖 B圖2.3 不同考馬斯亮藍(lán)染色Fig.2.3 Coomassie Blue Staining圖A：膠體考馬斯亮藍(lán)染色法 圖B：傳統(tǒng)考馬斯亮藍(lán)染色法Fig.A: colloidal Coomassie brilliant blue Fig.B: traditional Coomassie brilliant blue在相同聚焦條件下，圖 B 的背景明顯優(yōu)于圖 A，而且在橫線上半部分橫縱條紋相對(duì)較少。根據(jù) PDquest，圖 A 和圖 B 的蛋白點(diǎn)分別為 158 和 117，說(shuō)明膠體考馬斯亮藍(lán)染色法對(duì)于蛋白檢測(cè)靈敏度要高，從而說(shuō)明不同染色液染色的效果也影響實(shí)驗(yàn)圖譜的效果。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]家蠶感染質(zhì)型多角體病毒（BmCPV）后中腸組織差異蛋白質(zhì)分析[J]. 高坤,鄧祥元,裘智勇,覃光星,郭錫杰.  中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2013(13)
[2]鵝肝臟蛋白質(zhì)提取與雙向電泳分離技術(shù)研究[J]. 劉忠華,楊曉勤,張軍,段修軍,王健,董飚,龔道清.  中國(guó)家禽. 2011(21)
[3]利用雙向電泳技術(shù)分離野牛草葉片蛋白的方法研究[J]. 康俊梅,熊軍波,孫彥,李燕,沈靜,楊青川.  西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2010(02)
[4]蠶蛹的營(yíng)養(yǎng)成分分析[J]. 王彥平,劉潔,吳予明,劉利娥,呂全軍,吳擁軍.  鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2009(03)
[5]家蠶免疫相關(guān)基因和信號(hào)途徑的鑒定和比較分析(英文)[J]. 程廷才,夏慶友,許平震,譚祥,方婷,向仲懷.  昆蟲學(xué)報(bào). 2009(03)
[6]家蠶抗BmNPV品系與感性品系血淋巴液蛋白質(zhì)組的差異分析[J]. 蔡克亞,陳克平,劉曉勇,姚勤,李軍.  生物工程學(xué)報(bào). 2008(02)
[7]盤狀聚丙烯酰胺凝膠電泳法分離血清蛋白實(shí)驗(yàn)的幾點(diǎn)改進(jìn)[J]. 王琳.  生物學(xué)雜志. 2007(06)
[8]Molecular mechanism of TNF signaling and beyond[J]. Zheng-gang LIU* Cell and Cancer Biology Branch, Center for Cancer Research, National Cancer Institute, NIH, 9000 Rockville Pike Bethesda, MD 20892, USA.  Cell Research. 2005(01)
[9]家蠶相關(guān)蛋白質(zhì)研究進(jìn)展[J]. 趙峰,霍永康,汪延生,林健榮.  廣東蠶業(yè). 2004(04)
[10]家蠶蛹蟲草的人工培育及其成份分析[J]. 貢成良,吳友良,朱軍貞,潘中華,彭國(guó)平,樓鳳昌.  中國(guó)食用菌. 1993(04)

碩士論文
[1]家蠶蠶蛹過敏原蛋白質(zhì)組學(xué)和分子生物學(xué)研究[D]. 劉碩.南昌大學(xué) 2010
[2]耐輻射球菌基因DR1709突變體的蛋白質(zhì)組分析[D]. 田雙起.鄭州大學(xué) 2009
[3]蠶蛹蛋白肽的制備及其功能活性研究[D]. 王浩.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3264137