番木瓜是海南最重要的熱帶經(jīng)濟果樹之一,而番木瓜環(huán)斑病毒（Papaya ringspot virus,PRSV）一直是影響番木瓜產(chǎn)業(yè)發(fā)展的主要限制因素。自本研究組于2012年在轉(zhuǎn)基因抗RPSV番木瓜植株上新發(fā)現(xiàn)了番木瓜畸形花葉病毒（Papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV）,PLDMV危害呈逐年上升趨勢,逐漸上升為威脅海南番木瓜種植的毀滅性病害,已成為我國番木瓜生產(chǎn)上亟待解決的問題。目前,PLDMV在栽培技術(shù)上還很難通過化學防治的方法予以防控。雖然臺灣中興大學已研發(fā)出抗PLDMV和PRSV的雙抗轉(zhuǎn)基因木瓜,但存在轉(zhuǎn)基因植物的生態(tài)風險和食品安全性等方面問題,使轉(zhuǎn)基因番木瓜的推廣應用受到極大限制。為了探尋一種對環(huán)境友好、高效便捷、應用前景廣的綠色防控PLDMV方法。本研究采取交叉保護策略開展PLDMV的防控研究,交叉保護作為植物病毒病害的有效防治手段,已成功應用于柑橘衰退病、西葫蘆花葉病和番木瓜環(huán)斑病等的防治。而弱毒株的獲取是交叉保護應用的關(guān)鍵,為了快速獲得用于PLDMV防治的弱毒株,本研究利用人工定點突變策略快速構(gòu)建并篩選出具有交叉保護作用的PLD... 

【文章來源】：海南大學海南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．番木瓜畸形花葉病毒病癥狀特點??Ｆｉｇ．ｌ?Ｓｙｍｐｔｏｍｓ?ｏｆ?Ｐａｐａｙａ?ｌｅａｆ?ｄｉｓｔｏｒｔｉｏｎ?ｍｏｓａｉｃ?ｖｉｒｕｓ?ｄｉｓｅａｓｅ??

而接種空載體的陰性對照組番木瓜葉片未觀察到綠色熒光（圖４Ｃ）。??接種后４０天、５０天、６０天分別進行病癥觀察，接種野生型ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ＧＦＰ陽性對??照組番木瓜頂端葉片出現(xiàn)綠島，畸形越來越嚴重，呈現(xiàn)出雞爪狀、絲狀葉（圖５Ｂ）。而接??種弱毒突變體克隆?Ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ＧＦＰ－Ａ、ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ＧＦＰ－Ｂ、ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ＧＦＰ－Ｃ、??ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ＧＦＰ－Ｄ、ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ＧＦＰ－Ｅ的番木瓜葉片未見明顯病癥，與接種空載體的??陰性對照組基本一致。在ＵＶ燈下進行熒光觀察的結(jié)果顯示，與接種后３０天的觀察結(jié)果一??致，僅接種野生型Ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ＧＦＰ陽性對照組的番木瓜葉片能觀察到很強的綠色熒光，??而接種弱毒突變體克隆?Ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ＧＦＰ－Ａ、ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ＧＦＰ－Ｂ、ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ＧＦＰ－Ｃ、??ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ＧＦＰ－Ｄ、ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ＧＦＰ－Ｅ和陰性對照組的番木瓜葉片均未觀察到綠色熒??光（圖５Ａ）。??接種６０天后，接種弱毒突變體克�。穑常担樱校蹋模停郑牵疲校�、ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ＧＦＰ－Ｂ、??ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ＧＦＰ－Ｃ、ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ＧＦＰ－Ｄ?和?ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ＧＦＰ－Ｅ?的番木瓜葉片上未見明??顯病癥，但在莖桿上局部有輕微的、少量水潰狀出現(xiàn)（圖６Ａ），接種野生型ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ＧＦＰ??陽性對照組的番木瓜莖桿上出現(xiàn)嚴重水潰狀，而接種空載體的陰性對照組莖桿上未見水漬??狀（圖６Ａ）。切取莖桿上水漬狀表皮在熒光顯微鏡下觀察時，陽性對照組的水漬部分可觀??察到很強的綠色熒光

ｍＣｈｅｒｒｙ、ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ＧＦＰ－Ｃ＋ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ｍＣｈｅｎｙ、ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ＧＦＰ－Ｄ＋ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－??ｍＣｈｅｎｙ、ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ＧＦＰ－Ｅ＋ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ｍＣｈｅｒｒｙ?）與陰性對照組（ｐＧｒｅｅｎＩＩ－３５Ｓ＋??ｐＧｒｅｅｎＩＩ－３５Ｓ）?—致，未見明顯的病癥出現(xiàn)（圖９Ａ，Ｂ）。表明在接種３０天后，５種弱毒突??變體均表現(xiàn)出一定的交叉保護作用。??攻毒５０天后，陽性對照組（ｐＧｒｅｅｎｎ－３５Ｓ＋ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ｍＣｈｅｒｒｙ）的番木瓜植株頂端??發(fā)病葉皺縮、卷曲、畸形愈加明顯。而保護接種弱毒突變體克隆Ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ＧＦＰ－Ａ和??Ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ＧＦＰ－Ｃ?的實驗組（ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ＧＦＰ－Ａ＋ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ｍＣｈｅｎｙ、ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－??ＧＦＰ－Ｃ＋ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ｍＣｈｅｎｙ）葉片開始黃化，有斑駁的花紋出現(xiàn)；保護接種弱毒突變體??克隆?Ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ＧＦＰ－Ｄ?的實驗組（ｐＳＳＳ－ＰＬＤＭＶ－ＣＨＴ－Ｄ＋ｐＳＳＳ－ＰＬＤＭＶ－ｍＣｈｅｎｙ）也有葉??片黃化癥狀出現(xiàn)，但保護接種弱毒突變體克�。校常担樱校蹋模停郑牵疲校潞停穑常担樱校蹋模停郑牵疲校�??的實驗組（ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ＧＦＰ－Ｂ＋ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ｍＣｈｅｒｒｙ、ｐ３５Ｓ－ＰＬＤＭＶ－ＧＦＰ－Ｅ＋ｐ３５Ｓ－??ＰＬＤＭＶ－ｍＣｈｅｎｙ）與陰性對照組（ｐＧｒｅｅｎＩＩ－３５Ｓ＋?ｐＧｒｅｅｎＨ－３５Ｓ）?—致，仍未見明顯的癥狀??發(fā)生（圖９Ｃ）。??攻毒６０天后

【參考文獻】：
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：3246743