CRISPR/Cas9基因編輯系統(tǒng)是由細(xì)菌和古細(xì)菌抵御外源核酸入侵時(shí)的獲得性免疫機(jī)制發(fā)展而來的一項(xiàng)基因編輯技術(shù),近年來發(fā)展迅速,已成為基因功能活體研究的一種有效方法,廣泛應(yīng)用于許多模式（包括果蠅、家蠶等）及非模式生物中,但在重要農(nóng)業(yè)害蟲中的應(yīng)用很少。二化螟Chilo suppressalis（Walker）是重要的鉆蛀性害蟲,嚴(yán)重為害水稻、小麥、甘蔗等作物。長期以來,二化螟防治以化學(xué)防治為主,導(dǎo)致害蟲抗藥性及化學(xué)農(nóng)藥殘留等問題日趨嚴(yán)重,亟待研究和開發(fā)替代性防治技術(shù)。性信息素結(jié)合蛋白（Pheromone binding protein,PBP）是氣味結(jié)合蛋白（Odorant binding protein,OBP）的一個(gè)亞家族,主要功能被認(rèn)為是識別并結(jié)合疏水性的性信息素分子,攜帶其穿過親水性的感器淋巴液到達(dá)感受神經(jīng)樹突膜表面的受體,因而在性信息素感受中起重要作用,可望作為靶標(biāo)開發(fā)應(yīng)用于害蟲的行為調(diào)控。鱗翅目昆蟲通常含有多個(gè)PBP基因,不同PBP在功能上是否分化?它們在性信息素感受中的作用大小有無差異?對此,盡管有不少間接的研究推測,但由于技術(shù)的限制,很少有活體功能研究的直接證據(jù)。本文以二... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２?ＣＲＩＳＰＲ獲得新間隔序列示意圖（方銳等，２０１３）??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ｎｅｗ?ｓｐｃａｃｃｒ?ｏｆ?ＣＲＩＳＰＫ?ａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎ?（Ｆａｎｊｉ；?ｅｔ?ａｌ．，?２０１３）??３??

ＰＡＭ序列激活，經(jīng)ｓｇＲＮＡ介導(dǎo)，Ｃａｓ９蛋白可定位革Ｅ標(biāo)位點(diǎn)并對祀標(biāo)位點(diǎn)ＤＮＡ進(jìn)行??切害Ｉ】，形成ＤＳＢｓ，激發(fā)ＤＮＡ自身的ＮＨＥＪ修復(fù)機(jī)制（Ｍａｒｕｙａｍａ?ｅｔ?ａｌ．，２０１５），在ＤＮＡ??自我修復(fù)過程中易發(fā)生錯(cuò)配，導(dǎo)致堿基的插入或缺失，使靶標(biāo)位點(diǎn)發(fā)生突變（圖１－３）。??另外，宿主ＣＲＩＳＰＲ基因座因含有宿主自身基因組的間隔序列，從而避免了被??ｓｇＲＮＡ／Ｃａｓ９復(fù)合體定位并切割，起到了自我保護(hù)的作用（Ｍａｒｒａｆｆｉｎｉ?＆?Ｓｏｎｔｈｅｉｍｅｒ，??２０１０ａ）。??ｔｒ〇４?ｒＨ＼?＼?ｃ？ｉ９?（?Ｈ?－？２ｌ：ｓｎ２?＊？！?Ｗ?Ｙ?（?ＫＩＳ／？／＜??第＿?Ｉ?丨＿＿＿?Ｉ：??Ｊ?Ｌ—?｜下向里復(fù)Ｔ列??階段?｜??Ｓｔｅｐ?１?，ｒａｔｒＲＮＡ?Ｊ７??ｆＨ＿列?Ｉ??Ｊ?＊??Ｐｒｃ－ｔｒＲＮＡ?｜??一?？、一－?＾？、一??（ａｓ９＾｜??第一?｜?ＲＮｓｍｔＨＩ??階段?＼?；?ＪＤ??Ｓｔｅｐ?２??Ｍ受的硃箱或哦料丨）Ｎ／＼?????ｉｉｉｕｉｉｕｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉｍｉ??第三?．?／??階段????＇?＇??ｌｌＵＣＵＩＩＩＩｔＵＩＵＩＩＵＩＩ??Ｓｔｅｐ?３??圖１－３產(chǎn)膿鏈球菌ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９干擾噬菌體或外源質(zhì)粒入侵示意圖（方銳，２０１３）??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?ｏｆ?ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９?ｍｅｄｉａｔｅｄ?ＤＮＡ?ｄｏｕｂｌｅ－ｓｔｒａｎｄ?ｂｒｅａｋ?（Ｆａｎｇ?ｅｔ?ａｌ．

每個(gè)感器主要由銷原細(xì)胞（Ｔｈｅｃｏｇｅｎ?ｃｅｌｌ）、膜原細(xì)胞（Ｔｏｒｍｏｇｅｎ?ｃｅｌｌ）、毛原細(xì)??胞（Ｔｒｉｃｈｏｇｅｎ?ｃｅｌｌ）和感覺細(xì)胞（Ｓｅｎｓｏｒｙ?ｃｅｌｌ）構(gòu)成（Ｓｔｅｉｎｂｒｅｃｈｔ，?１９９７），感器包裹并??起到保護(hù)嗅覺神經(jīng)元的作用（Ｚａｃｈａｒｕｋ，２００３）（圖１－５）。嗅覺感器外部形態(tài)如毛發(fā)狀??或刺狀，其表面氣孔密布，性信息素或植物揮發(fā)物等氣味分子通過感器表面的氣孔進(jìn)??入到感器內(nèi)部的水溶性感器淋巴液（Ｓｅｎｓｉｌｌｕｍ?ｌｙｍｐｈ）中。一般來說，每個(gè)昆蟲嗅覺??感器含有１－４個(gè)嗅覺神經(jīng)元，每個(gè)嗅覺神經(jīng)元具有高度發(fā)達(dá)的樹突（ｄｅｎｄｒｉｔｅ）和軸突??（ａｘｏｎ），位于樹突膜上的嗅覺受體特異性結(jié)合性信息素或其他氣味物質(zhì)，將信號傳??遞至軸突，再由軸突傳遞至觸角神經(jīng)葉（Ａｎｔｅｎｎａｌ?ｌｏｂｅ，?ＡＬ）并加工信號，然后在腦??中將嗅覺與其他感覺形式進(jìn)行整合，最后將嗅覺信號轉(zhuǎn)化為行為指令（Ｊａｃｑｕｉｎｊｏｌｙ?＆??Ｍｅｒｌｉｎ，?２００４）。??／ｆｊ??▲

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3238736