白僵�。╓hite muscardine）是柞蠶Antheraea pernyi Guérin-Méneville被球孢白僵菌Beauveria bassiana侵染所致的一種真菌病,一旦流行將對蠶業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。目前人們對白僵病的防御還缺乏有效的治理手段,對白僵菌侵染柞蠶的分子機制更是知之甚少。本研究利用電鏡技術(shù)觀察了球孢白僵菌侵染柞蠶蛹體壁和脂肪體的病變過程。同時,利用qRT-PCR技術(shù)檢測了柞蠶染病后,肽聚糖識別蛋白A（Ap-PGRP-A）、β-1,3-葡聚糖識別蛋白（βGRP）、類免疫球蛋白（Ap-hemolin-like）、免疫凝集素A（ImmulectinA）、載脂蛋白Ⅲ（Aplipophorin-Ⅲ）、真菌蛋白酶抑制劑8（ApCP8）、絲氨酸蛋白酶抑制劑4（Sepin like protein4）、溶菌酶（Lysozyme）、防御蛋白（ApDef）、熱休克蛋白21.4（Ap-sHSP21.4）、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶θ（Glutathione S-transferase theta）和核轉(zhuǎn)錄因子（Ap-dorsalA）等12個免疫基因在血淋巴、脂肪體和體壁等3個組織中的表達... 

【文章來源】：大連理工大學(xué)遼寧省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
1 綜述
    1.1 球孢白僵菌的研究進展
        1.1.1 球孢白僵菌的概述
        1.1.2 球孢白僵菌的分類鑒定技術(shù)
        1.1.3 影響球孢白僵菌致病性的因素
        1.1.4 球孢白僵菌侵染昆蟲的機制
    1.2 昆蟲被白僵菌侵染后的病理變化
        1.2.1 白僵菌侵染昆蟲體壁的電鏡觀察
        1.2.2 白僵菌侵染昆蟲脂肪體的電鏡觀察
    1.3 昆蟲的免疫應(yīng)答
        1.3.1 昆蟲的先天免疫
        1.3.2 柞蠶免疫相關(guān)基因
    1.4 目的意義
2 球孢白僵菌的分離和鑒定
    2.1 實驗材料與實驗設(shè)備
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 實驗儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 白僵菌菌株的分離
        2.2.2 形態(tài)學(xué)鑒定
        2.2.3 分子生物學(xué)鑒定
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果
        2.3.2 分子生物學(xué)鑒定結(jié)果
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
3 球孢白僵菌侵染柞蠶的電鏡觀察
    3.1 實驗材料與實驗設(shè)備
        3.1.1 供試菌種和昆蟲
        3.1.2 實驗試劑
        3.1.3 實驗儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 球孢白僵菌分生孢子的收集
        3.2.2 球孢白僵菌穿透柞蠶體壁的掃描電鏡觀察
        3.2.3 球孢白僵菌感染柞蠶脂肪體的透射電鏡觀察
    3.3 實驗結(jié)果與分析
        3.3.1 球孢白僵菌侵染柞蠶蛹的臨床癥狀
        3.3.2 球孢白僵菌注射侵染柞蠶的掃描電鏡觀察
        3.3.3 球孢白僵菌穿透柞蠶體壁的掃描電鏡觀察
        3.3.4 球孢白僵菌侵染柞蠶脂肪體的透射電鏡觀察
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
4 柞蠶被球孢白僵菌侵染后免疫基因的差異表達分析
    4.1 實驗材料及儀器設(shè)備
        4.1.1 供試菌種和昆蟲
        4.1.2 實驗試劑
        4.1.3 實驗儀器
    4.2 實驗方法
        4.2.1 球孢白僵菌的接種
        4.2.2 柞蠶各組織的收集
        4.2.3 實時定量PCR引物設(shè)計
        4.2.4 總RNA的提取及cDNA的獲得
        4.2.5 實時定量熒光PCR反應(yīng)
        4.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 模式識別受體基因的差異表達分析
        4.3.2 其他免疫相關(guān)基因的差異表達分析
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
5 柞蠶被球孢白僵菌侵染后的生理指標檢測
    5.1 實驗材料及儀器設(shè)備
        5.1.1 實驗材料
        5.1.2 實驗試劑
        5.1.3 實驗儀器
    5.2 實驗方法
        5.2.1 球孢白僵菌的接種
        5.2.2 柞蠶各組織的收集
        5.2.3 蛋白質(zhì)定量測試
        5.2.4 超氧化物歧化酶(SOD)活性測定
        5.2.5 過氧化物酶(POD)活性測定
        5.2.6 過氧化氫酶(CAT)活性測定
        5.2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 柞蠶被球孢白僵菌侵染后SOD酶活性變化
        5.3.2 柞蠶被球孢白僵菌侵染后POD酶活性變化
        5.3.3 柞蠶被球孢白僵菌侵染后CAT酶活性變化
    5.4 討論
    5.5 小結(jié)
結(jié)論
展望
參考文獻
附錄A 論文中Bba1的ITS序列
附錄B 論文中所用縮略詞
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]柞蠶核型多角體病毒侵染對柞蠶幼蟲體內(nèi)部分保護酶活性的影響[J]. 賈姝,宋策,赫英姿,劉孝良,于庭洪,趙翀,左玲玲.  蠶業(yè)科學(xué). 2016(06)
[2]菜青蟲感染金龜子綠僵菌后體內(nèi)幾種保護酶活性的變化[J]. 李世廣,竇婷婷,付小伶,劉祝琴,何超.  植物保護. 2016(03)
[3]柞蠶真菌蛋白酶抑制劑基因CP8的克隆與表達分析[J]. 錢岑,王芳,李勝,劉朝良.  安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2015(05)
[4]嗜菌異小桿線蟲侵染后暗黑鰓金龜和大黑鰓金龜幼蟲脂肪體和中腸組織超微結(jié)構(gòu)觀察[J]. 吳文丹,孫昊雨,席景會,尹姣,張帥,曹雅忠,李克斌,肖春.  昆蟲學(xué)報. 2015(08)
[5]布氏白僵菌侵染楊干象幼蟲體壁的掃描電鏡及透射電鏡觀察[J]. 曹慶杰,遲德富,宇佳,冉亞麗.  北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2015(05)
[6]不同微生物誘導(dǎo)柞蠶溶菌酶基因的表達分析[J]. 宋佳,姜義仁,王勇,孫影,楊瑞生,石生林,秦利.  蠶業(yè)科學(xué). 2013(04)
[7]家蠶滯育卵與非滯育卵中幾種關(guān)鍵酶活性的比較[J]. 范蘭芬,鐘楊生,林健榮.  昆蟲學(xué)報. 2011(11)
[8]ApNPV侵染對柞蠶蛹體內(nèi)保護酶活性的影響[J]. 石生林,張濤,李群,王學(xué)英.  沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2008(05)
[9]綠僵菌侵染小菜蛾幼蟲過程的透射電鏡觀察[J]. 王音,雷仲仁,張青文,問錦曾.  昆蟲學(xué)報. 2006(06)

博士論文
[1]家蠶防御球孢白僵菌感染相關(guān)免疫基因的研究[D]. 呂丁丁.江蘇科技大學(xué) 2017

碩士論文
[1]三個柞蠶脂肪酶基因的克隆及表達分析[D]. 方素云.大連理工大學(xué) 2014
[2]柞蠶模式識別受體βGRP、immulectins基因的克隆及表達分析[D]. 李鳳娟.大連理工大學(xué) 2012



本文編號：3226985