CSBV重組結(jié)構(gòu)蛋白抗原性研究和雙抗夾心ELISA試劑盒研制
發(fā)布時間：2021-06-11 20:45
中華蜜蜂囊狀幼蟲�。–hinese Sacbrood Disease,CSBD）,是由中華蜜蜂囊狀幼蟲病毒（Chinese Sacbrood Virus,CSBV）引起的一種高致病性、高傳染性的病毒性疾病,俗稱為“蜂癌”,可以造成蜜蜂幼蟲的大量死亡。然而,目前還沒有合適的包括CSBV在內(nèi)的蜜蜂病毒培養(yǎng)體系,這極大地限制了CSBV的研究和防治。在CSBV的檢測上,癥狀診斷不夠確切,電鏡觀察和血清學檢測費力耗時,尤其是很難獲得CSBV標準陽性血清,使得通過免疫學方法對CSBV進行檢測的研究鮮有報道,而分子生物學診斷則面臨需要特殊實驗設(shè)備、成本較高等問題,只能用于實驗室檢測,無法大面積推廣。鑒于此,本研究以本實驗室分離到的CSBV基因為基礎(chǔ),分別以優(yōu)化改造后用Linker連接的VP1、VP2基因和優(yōu)化后的連續(xù)編碼VP2、VP4和VP1整段基因為靶基因,進行原核表達,并用純化的表達蛋白免疫小鼠和雞,比較這兩個表達蛋白的抗原性,篩選出抗原性較好的蛋白代替CSBV作為免疫原,制備單克隆抗體。利用制備的單克隆抗體研制雙抗體夾心ELISA檢測試劑盒,并對試劑盒的性能進行檢測。具體研究內(nèi)容如下:1.目的...
【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學黑龍江省 211工程院校
【文章頁數(shù)】：77 頁
【學位級別】：博士
【部分圖文】：
CSBV結(jié)構(gòu)蛋白Fig.1-1StructuralProteinofCSBV
東北農(nóng)業(yè)大學獸醫(yī)專業(yè)學位博士學位論文成功的擴增出了 VP2-P-VP1（1708bp）和 VP2-VP4-VP1（1771bp）（圖 3-2）。連接到 pMD1載體上，經(jīng)雙酶切鑒定（圖 3-3）為陽性的質(zhì)粒，送生工生物工程（上海）股份有限公司行測序，測序結(jié)果正確，成功構(gòu)建了 pMD18-T-VP2-P-VP1 和 pMD18-T-VP2-VP4-VP1 質(zhì)
東北農(nóng)業(yè)大學獸醫(yī)專業(yè)學位博士學位論文成功的擴增出了 VP2-P-VP1（1708bp）和 VP2-VP4-VP1（1771bp）（圖 3-2）。連接到 pMD1載體上，經(jīng)雙酶切鑒定（圖 3-3）為陽性的質(zhì)粒，送生工生物工程（上海）股份有限公司行測序，測序結(jié)果正確，成功構(gòu)建了 pMD18-T-VP2-P-VP1 和 pMD18-T-VP2-VP4-VP1 質(zhì)
【參考文獻】：
期刊論文
[1]慢性蜜蜂麻痹病毒SP1蛋白的原核表達及免疫原性分析[J]. 李明,孫莉,馬鳴瀟,侯振中. 病毒學報. 2019(03)
[2]我國單克隆抗體藥物產(chǎn)業(yè)化進展淺談[J]. 陶維紅,李宗海,李榮秀. 生物產(chǎn)業(yè)技術(shù). 2019(02)
[3]RNAi靶向VP2基因抑制中蜂囊狀幼蟲病毒在中華蜜蜂幼蟲體內(nèi)復(fù)制研究[J]. 馬躍宇,費東亮,郭亞茜,金宏凱,張溪研,馬鳴瀟. 病毒學報. 2019(01)
[4]防治中蜂囊狀幼蟲病的思考[J]. 劉守禮,李旭濤. 蜜蜂雜志. 2017(09)
[5]二重PCR快速檢測中蜂囊狀幼蟲病病毒與東方蜜蜂微孢子蟲方法的建立[J]. 林麗花,黃偉峰,陳瓊艷,郭少娟,趙翠霞,雷珊珊,蘇松坤,李繼蓮,黃少康. 中國科技論文. 2016(18)
[6]狄斯瓦螨和蜜蜂殘翅病毒對蜜蜂健康的協(xié)同影響[J]. 藺哲廣,秦瑤,李利,王帥,鄭火青,胡福良. 昆蟲學報. 2016(07)
[7]2015年江西省部分蜂場意蜂大量死亡的初步分析[J]. 夏曉翠,楊柳,劉鋒. 中國蜂業(yè). 2016(06)
[8]雜交-雜交瘤技術(shù)制備BsMAb的研究進展及其在食品安全檢測中的應(yīng)用[J]. 王鋒,王宇,王弘,肖治理. 食品科學. 2016(13)
[9]蜜蜂囊狀幼蟲病研究進展[J]. 李薇,薛菲,Wubie Abebe Jenberie,黃家興,國占寶,周婷,徐書法. 動物醫(yī)學進展. 2014(06)
[10]蜂農(nóng)“傷不起”——對2013年陜西幾起重大蜜蜂死亡事件的思考[J]. 黎九洲,黎哲. 蜜蜂雜志. 2013(12)
碩士論文
[1]豬A型口蹄疫病毒sIgA間接ELISA方法的建立[D]. 羅虹.甘肅農(nóng)業(yè)大學 2018
[2]中蜂幼蟲膜蛋白酵母雙雜交文庫構(gòu)建及與中蜂囊狀幼蟲病毒VP2互作宿主蛋白篩選[D]. 岳金金.錦州醫(yī)科大學 2018
[3]抗中蜂囊狀幼蟲病毒VP2蛋白卵黃抗體制備及其間接ELISA檢測方法的建立[D]. 李芳兵.錦州醫(yī)科大學 2017
本文編號：3225253
【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學黑龍江省 211工程院校
【文章頁數(shù)】：77 頁
【學位級別】：博士
【部分圖文】：
CSBV結(jié)構(gòu)蛋白Fig.1-1StructuralProteinofCSBV
東北農(nóng)業(yè)大學獸醫(yī)專業(yè)學位博士學位論文成功的擴增出了 VP2-P-VP1（1708bp）和 VP2-VP4-VP1（1771bp）（圖 3-2）。連接到 pMD1載體上，經(jīng)雙酶切鑒定（圖 3-3）為陽性的質(zhì)粒，送生工生物工程（上海）股份有限公司行測序，測序結(jié)果正確，成功構(gòu)建了 pMD18-T-VP2-P-VP1 和 pMD18-T-VP2-VP4-VP1 質(zhì)
東北農(nóng)業(yè)大學獸醫(yī)專業(yè)學位博士學位論文成功的擴增出了 VP2-P-VP1（1708bp）和 VP2-VP4-VP1（1771bp）（圖 3-2）。連接到 pMD1載體上，經(jīng)雙酶切鑒定（圖 3-3）為陽性的質(zhì)粒，送生工生物工程（上海）股份有限公司行測序，測序結(jié)果正確，成功構(gòu)建了 pMD18-T-VP2-P-VP1 和 pMD18-T-VP2-VP4-VP1 質(zhì)
【參考文獻】：
期刊論文
[1]慢性蜜蜂麻痹病毒SP1蛋白的原核表達及免疫原性分析[J]. 李明,孫莉,馬鳴瀟,侯振中. 病毒學報. 2019(03)
[2]我國單克隆抗體藥物產(chǎn)業(yè)化進展淺談[J]. 陶維紅,李宗海,李榮秀. 生物產(chǎn)業(yè)技術(shù). 2019(02)
[3]RNAi靶向VP2基因抑制中蜂囊狀幼蟲病毒在中華蜜蜂幼蟲體內(nèi)復(fù)制研究[J]. 馬躍宇,費東亮,郭亞茜,金宏凱,張溪研,馬鳴瀟. 病毒學報. 2019(01)
[4]防治中蜂囊狀幼蟲病的思考[J]. 劉守禮,李旭濤. 蜜蜂雜志. 2017(09)
[5]二重PCR快速檢測中蜂囊狀幼蟲病病毒與東方蜜蜂微孢子蟲方法的建立[J]. 林麗花,黃偉峰,陳瓊艷,郭少娟,趙翠霞,雷珊珊,蘇松坤,李繼蓮,黃少康. 中國科技論文. 2016(18)
[6]狄斯瓦螨和蜜蜂殘翅病毒對蜜蜂健康的協(xié)同影響[J]. 藺哲廣,秦瑤,李利,王帥,鄭火青,胡福良. 昆蟲學報. 2016(07)
[7]2015年江西省部分蜂場意蜂大量死亡的初步分析[J]. 夏曉翠,楊柳,劉鋒. 中國蜂業(yè). 2016(06)
[8]雜交-雜交瘤技術(shù)制備BsMAb的研究進展及其在食品安全檢測中的應(yīng)用[J]. 王鋒,王宇,王弘,肖治理. 食品科學. 2016(13)
[9]蜜蜂囊狀幼蟲病研究進展[J]. 李薇,薛菲,Wubie Abebe Jenberie,黃家興,國占寶,周婷,徐書法. 動物醫(yī)學進展. 2014(06)
[10]蜂農(nóng)“傷不起”——對2013年陜西幾起重大蜜蜂死亡事件的思考[J]. 黎九洲,黎哲. 蜜蜂雜志. 2013(12)
碩士論文
[1]豬A型口蹄疫病毒sIgA間接ELISA方法的建立[D]. 羅虹.甘肅農(nóng)業(yè)大學 2018
[2]中蜂幼蟲膜蛋白酵母雙雜交文庫構(gòu)建及與中蜂囊狀幼蟲病毒VP2互作宿主蛋白篩選[D]. 岳金金.錦州醫(yī)科大學 2018
[3]抗中蜂囊狀幼蟲病毒VP2蛋白卵黃抗體制備及其間接ELISA檢測方法的建立[D]. 李芳兵.錦州醫(yī)科大學 2017
本文編號：3225253
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