馬拉硫磷（Malathion,MT）和毒死蜱（Chlorpyrifos,CPF）是兩種常見的有機(jī)磷農(nóng)藥,因其能夠有效抑制病蟲害,提高作物產(chǎn)量而在世界范圍內(nèi)廣泛使用。核桃多酚提取物（Walnut Polyphenol Extract,WPE）具有很強(qiáng)的抗氧化、抗炎和抗癌等特性,能有效緩解有毒物質(zhì)對(duì)人類及其它哺乳動(dòng)物造成的損傷。本論文在確定MT和CPF對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞具有免疫毒性的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步研究WPE對(duì)MT和CPF所致免疫毒性的影響,并探討其相關(guān)機(jī)制。主要研究結(jié)果如下:（1）MT和CPF均顯著抑制脾細(xì)胞活力,而WPE以濃度依賴性的方式有效緩解MT和CPF對(duì)脾細(xì)胞活力的抑制作用。（2）MT選擇性抑制脾T淋巴細(xì)胞活力,顯著抑制CD3⁺、CD4⁺和CD8⁺T細(xì)胞的百分含量,而CPF選擇性降低脾B淋巴細(xì)胞活力,顯著減少CD19⁺B的含量。WPE處理顯著增加暴露于MT和CPF的脾淋巴細(xì)胞活力,上調(diào)脾淋巴細(xì)胞亞群百分比含量,有效緩解MT和CPF對(duì)脾淋巴細(xì)胞的增殖毒性作用。（3）MT顯著降低T細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子白細(xì)... 

【文章來源】：北京林業(yè)大學(xué)北京市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

技術(shù)路線圖

細(xì)胞的增殖毒性3.1.1馬拉硫磷和毒死蜱對(duì)脾細(xì)胞增殖的影響為研究MT和CPF對(duì)小鼠脾細(xì)胞增殖的影響，以培養(yǎng)基為對(duì)照組，使用不同濃度的MT和CPF（10-7M、10-6M、10-5M和10-4M）處理小鼠脾細(xì)胞48h后，用MTT法測(cè)定脾細(xì)胞活力。結(jié)果如圖3.1所示，與對(duì)照組相比，MT和CPF均抑制脾細(xì)胞活力，且在此濃度范圍內(nèi)MT和CPF對(duì)細(xì)胞活力的抑制具有濃度依賴性。在10-5M的暴露濃度下，MT和CPF均具有顯著細(xì)胞增殖毒性，對(duì)脾細(xì)胞活力產(chǎn)生明顯抑制作用，分別使脾細(xì)胞活力降至對(duì)照的87.8%和86.1%。所以，10-5M被選為后續(xù)所有實(shí)驗(yàn)中MT和CPF的濃度。圖3.1MT和CPF對(duì)脾細(xì)胞活力的影響Fig.3.1EffectsofMTandCPFonsplenocyteviability注：圖A，用不同濃度MT處理脾細(xì)胞48h后進(jìn)行細(xì)胞增殖分析實(shí)驗(yàn)；圖B，用不同濃度CPF處理脾細(xì)胞48h后進(jìn)行細(xì)胞增殖分析實(shí)驗(yàn)；10-7、10-6、10-5、10-4分別代表處理脾細(xì)胞的農(nóng)藥濃度；與對(duì)照組相比，*為顯著性差異，即p＜0.05，**為極顯著性差異，即p＜0.01。3.1.2核桃多酚緩解馬拉硫磷和毒死蜱對(duì)脾細(xì)胞的增殖毒性為研究WPE對(duì)MT和CPF抑制脾細(xì)胞增殖的影響，以培養(yǎng)基為對(duì)照組，10-5M的MT和CPF為染毒組，將不同濃度的WPE（1.0、5.0和10.0μg/mL）和MT或不同濃度的WPE（1.0、5.0和10.0μg/mL）和CPF處理脾細(xì)胞48h，用MTT法檢測(cè)脾細(xì)胞活力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3.2所示，與單獨(dú)的MT和CPF處理組相比，1.0~10.0μg/mL的WPE以濃度依賴性的方式提高了農(nóng)藥處理組的脾細(xì)胞活力。1.0~10.0μg/mL的WPE共同培養(yǎng)可使暴露于MT的脾細(xì)胞活力由MT組的87.8%分別恢復(fù)至96.4%、104.3%和109.3%。同樣的，1.0~10.0μg/mL的WPE使CPF處理的脾細(xì)胞活力由CPF組的86.1%分別提高至95.4%、98.7%和111.7%，且均具有顯著性。這些結(jié)果表明WPE

核桃多酚對(duì)馬拉硫磷和毒死蜱免疫毒性的保護(hù)作用20緩解MT和CPF對(duì)脾細(xì)胞活力的抑制作用，抑制MT和CPF的增殖毒性。為研究單獨(dú)WPE處理對(duì)脾細(xì)胞增殖的影響，以培養(yǎng)基為對(duì)照組，分別用1.0~10.0μg/mL的WPE處理脾細(xì)胞48h，用MTT法測(cè)定細(xì)胞活力。如圖3.2所示，結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，1.0~10.0μg/mL的WPE單獨(dú)處理不會(huì)顯著影響脾細(xì)胞活力。上述結(jié)果表明，WPE雖然緩解MT和CPF誘導(dǎo)的脾細(xì)胞增殖毒性，但其本身對(duì)脾細(xì)胞活力沒有顯著影響。圖3.2WPE對(duì)脾細(xì)胞和暴露于MT和CPF的脾細(xì)胞活力的影響Fig.3.2EffectsofWPEoncellviabilityinsplenocytesandsplenocytesexposedtoMTandCPF注：圖A，用不同濃度的WPE（1、5和10μg/mL）單獨(dú)或與10-5MMT聯(lián)合處理脾細(xì)胞48h后進(jìn)行細(xì)胞增殖分析實(shí)驗(yàn)；圖B，用不同濃度的WPE（1、5和10μg/mL）單獨(dú)或與10-5MCPF聯(lián)合處理脾細(xì)胞48h后進(jìn)行細(xì)胞增殖分析實(shí)驗(yàn)；與對(duì)照組相比，*為顯著性差異，即p＜0.05，**為極顯著性差異，即p＜0.01；與MT或CPF組相比：#為顯著性差異，即p<0.05，##為極顯著性差異，即p<0.01。3.1.3不同抗氧化劑對(duì)馬拉硫磷和毒死蜱誘導(dǎo)的脾細(xì)胞增殖毒性的影響為研究不同抗氧化劑對(duì)MT和CPF抑制脾細(xì)胞增殖的影響，選擇三種有代表性、抗氧化能力強(qiáng)的抗氧化劑鞣花酸（EA）、原花青素（PC）和槲皮素（QUE）作為陽(yáng)性對(duì)照，以培養(yǎng)基為對(duì)照組，10-5M的MT和CPF為染毒組，用MTT法檢測(cè)脾細(xì)胞活力，研究相同濃度的WPE、EA、PC和QUE對(duì)MT和CPF抑制脾細(xì)胞增殖的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3.3所示，與EA、PC和QUE處理組相比，相同濃度的WPE對(duì)脾細(xì)胞增殖的恢復(fù)作用更顯著。這些結(jié)果表明WPE對(duì)MT和CPF誘導(dǎo)的脾細(xì)胞增殖毒性的保護(hù)作用比相同濃度的EA、PC和QUE更強(qiáng)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]黃芪甲苷對(duì)阿爾茨海默癥小鼠腦內(nèi)氧化應(yīng)激和NADPH氧化酶蛋白表達(dá)的影響[J]. 趙啟躍,姚遙,鄭萍,李南,王偉,韓欣益,李娟.  寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2018(11)
[2]川芎提取物對(duì)電離輻照損傷實(shí)驗(yàn)小鼠脾臟組織細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響[J]. 李敏,趙領(lǐng),劉真宏,羅芳芳,易輝燕,趙德華,唐文誠(chéng),王繼生.  中國(guó)藥理學(xué)通報(bào). 2018(11)
[3]果品中有機(jī)磷農(nóng)藥聯(lián)合毒性研究進(jìn)展[J]. 張思遠(yuǎn),方琪,焦必寧.  果樹學(xué)報(bào). 2017(01)
[4]2015年我國(guó)農(nóng)藥生產(chǎn)與使用概況[J]. 束放,熊延坤,韓梅.  農(nóng)藥科學(xué)與管理. 2016(07)
[5]4種常見殘留農(nóng)藥聯(lián)合作用對(duì)小鼠免疫毒性研究[J]. 劉英華,張大龍,張靜姝,張靜,姜淑卿,李樹飛.  毒理學(xué)雜志. 2016(01)
[6]有機(jī)磷農(nóng)藥的免疫毒性[J]. 邱麗娟,張重陽(yáng),劉宇鵬.  災(zāi)害醫(yī)學(xué)與救援(電子版). 2015(04)
[7]氧化樂果長(zhǎng)期暴露對(duì)大鼠骨骼肌氧化損傷的研究[J]. 時(shí)佳宏,王東洲,侯雪,潘奇正,王清,范悅昕,安立峰.  中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué). 2013(08)
[8]2010年黑龍江省市售蔬菜中有機(jī)磷農(nóng)藥的監(jiān)測(cè)結(jié)果[J]. 付宇,陳彥鳳,劉長(zhǎng)福,孫艷芳,金洪偉,張毅.  職業(yè)與健康. 2012(19)
[9]圓弧青霉菌毒素—青霉酸對(duì)小鼠脾臟組織細(xì)胞凋亡和Bcl-2、Bax及Fas/FasL基因mRNA表達(dá)的影響[J]. 雷紅宇,袁慧,鄔靜,文利新,袁莉蕓,袁志航,郭樂,晏輝云.  中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2011(01)
[10]核桃油功效成分研究進(jìn)展[J]. 趙聲蘭,陳朝銀,葛鋒,韓本勇.  云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2010(06)

碩士論文
[1]中國(guó)七個(gè)主產(chǎn)區(qū)核桃綜合品質(zhì)差異比較[D]. 李世亮.中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院 2018
[2]有機(jī)磷農(nóng)藥毒死蜱低劑量重復(fù)染毒致雄性大鼠生殖毒性及其作用機(jī)制研究[D]. 焦利飛.中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院 2011



本文編號(hào)：3216035