發(fā)布時間：2021-05-22 22:25

　　水稻（Oryza sativa）是一種世界上重要的谷類作物,是全球近30多億人的主食。同時水稻也是遭受蟲害最為嚴重的農作物之一,全球每年因鱗翅目害蟲所造成的稻米減產就達到了近1000萬噸。而長期使用化學農藥,不但增加了種植成本、引起害蟲抗性,還會使環(huán)境造成污染,破壞生態(tài)平衡。因此,利用轉基因技術將外源抗蟲基因導入到水稻基因組中是最有效的解決蟲害的途徑。目前,最常用的抗蟲基因為Bt基因,并且也獲得了多種具有抗蟲性狀的轉Bt基因水稻品系。本研究以轉cry2A*基因抗蟲水稻空育131（HD₂品系）和松粳9號（HD₄品系）為實驗材料,采用Basta抗感性檢測、PCR檢測、膠體金免疫層析檢測、real time PCR檢測、酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）、Southern印跡雜交、全基因組重測序及土壤微生物檢測等方法,從DNA水平、mRNA水平、蛋白水平及轉基因植株與非轉基因對照間土壤微生物的差異性進行研究,鑒定出目的基因拷貝數(shù)低、遺傳穩(wěn)定性強且外源蛋白表達量高、對土壤環(huán)境的安全性影響不顯著的轉基因抗蟲水稻植株。主要研究結果為:1、利用Basta篩選、... 

【文章來源】：黑龍江大學黑龍江省

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第1章 引言
    1.1 轉基因抗蟲植物應用的抗蟲基因
        1.1.1 Bt基因
        1.1.2 蛋白酶抑制劑基因
        1.1.3 植物外源凝集素基因
    1.2 轉基因抗蟲植物的檢測方法
        1.2.1 PCR檢測
        1.2.2 膠體金免疫層析技術
        1.2.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗
        1.2.4 Southern印跡雜交
        1.2.5 全基因組重測序
    1.3 轉基因植物對土壤生態(tài)系統(tǒng)的影響
        1.3.1 轉基因植物外源基因在土壤中的殘留
        1.3.2 轉基因植物對土壤微生物的影響
        1.3.3 轉基因植物對土壤動物的影響
        1.3.4 轉基因植物對土壤理化性質的影響
    1.4 轉基因水稻的食用安全性評價
        1.4.1 轉基因水稻食用安全性評價原則
        1.4.2 轉基因水稻實質等同性評價
        1.4.3 轉基因水稻毒理學評價
        1.4.4 轉基因水稻致敏性評價
    1.5 研究目的及意義
第2章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 供試水稻
        2.1.2 土壤
        2.1.3 外源基因及其表達載體
        2.1.4 主要實驗試劑
        2.1.5 主要實驗儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 Basta抗感性檢測
        2.2.2 PCR檢測
        2.2.3 Real-time PCR檢測
        2.2.4 Bt蛋白檢測
        2.2.5 Southern blot檢測
        2.2.6 農藝性狀考察及米質檢測
        2.2.7 全基因組重測序
        2.2.8 土壤微生物檢測
第3章 結果與分析
    3.1 水稻HD_2和HD_4的篩選及PCR檢測
        3.1.1 Basta篩選
        3.1.2 膠體金免疫層析試紙條篩選
        3.1.3 cry2A*基因PCR檢測
    3.2 水稻HD_2和HD_4目的基因表達量
        3.2.1 mRNA
        3.2.2 蛋白質
    3.3 水稻HD_2和HD_4目的基因拷貝數(shù)
    3.4 水稻HD_2和HD_4農藝性狀及米質
    3.5 水稻HD_2和HD_4目的基因插入位點
    3.6 水稻HD_2和HD_4對土壤微生物的影響
        3.6.1 對土壤微生物數(shù)量的影響
        3.6.2 目的基因向土壤微生物的水平擴散
第4章 討論
    4.1 轉cry2A*基因早粳稻農藝性狀發(fā)生改變的分析
    4.2 種植轉基因作物對土壤微生物造成潛在影響的分析
    4.3“綠色超級稻”的培育及后續(xù)實驗的展望
第5章 結論
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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[3]RNAi介導的棉鈴蟲HaHR3基因沉默及轉基因植物抗蟲機理研究[D]. 熊葉輝.中國農業(yè)科學院 2013
[4]轉基因產品檢測標準物質研究[D]. 張麗.中國農業(yè)科學院 2012
[5]兩種轉基因大米食用安全性的毒理學研究[D]. 周興華.江蘇大學 2012



本文編號：3201764