水稻（Oryza sativa）是一種世界上重要的谷類作物,是全球近30多億人的主食。同時水稻也是遭受蟲害最為嚴(yán)重的農(nóng)作物之一,全球每年因鱗翅目害蟲所造成的稻米減產(chǎn)就達到了近1000萬噸。而長期使用化學(xué)農(nóng)藥,不但增加了種植成本、引起害蟲抗性,還會使環(huán)境造成污染,破壞生態(tài)平衡。因此,利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將外源抗蟲基因?qū)氲剿净蚪M中是最有效的解決蟲害的途徑。目前,最常用的抗蟲基因為Bt基因,并且也獲得了多種具有抗蟲性狀的轉(zhuǎn)Bt基因水稻品系。本研究以轉(zhuǎn)cry2A*基因抗蟲水稻空育131（HD₂品系）和松粳9號（HD₄品系）為實驗材料,采用Basta抗感性檢測、PCR檢測、膠體金免疫層析檢測、real time PCR檢測、酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）、Southern印跡雜交、全基因組重測序及土壤微生物檢測等方法,從DNA水平、mRNA水平、蛋白水平及轉(zhuǎn)基因植株與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ臻g土壤微生物的差異性進行研究,鑒定出目的基因拷貝數(shù)低、遺傳穩(wěn)定性強且外源蛋白表達量高、對土壤環(huán)境的安全性影響不顯著的轉(zhuǎn)基因抗蟲水稻植株。主要研究結(jié)果為:1、利用Basta篩選、... 

【文章來源】：黑龍江大學(xué)黑龍江省

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第1章 引言
    1.1 轉(zhuǎn)基因抗蟲植物應(yīng)用的抗蟲基因
        1.1.1 Bt基因
        1.1.2 蛋白酶抑制劑基因
        1.1.3 植物外源凝集素基因
    1.2 轉(zhuǎn)基因抗蟲植物的檢測方法
        1.2.1 PCR檢測
        1.2.2 膠體金免疫層析技術(shù)
        1.2.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗
        1.2.4 Southern印跡雜交
        1.2.5 全基因組重測序
    1.3 轉(zhuǎn)基因植物對土壤生態(tài)系統(tǒng)的影響
        1.3.1 轉(zhuǎn)基因植物外源基因在土壤中的殘留
        1.3.2 轉(zhuǎn)基因植物對土壤微生物的影響
        1.3.3 轉(zhuǎn)基因植物對土壤動物的影響
        1.3.4 轉(zhuǎn)基因植物對土壤理化性質(zhì)的影響
    1.4 轉(zhuǎn)基因水稻的食用安全性評價
        1.4.1 轉(zhuǎn)基因水稻食用安全性評價原則
        1.4.2 轉(zhuǎn)基因水稻實質(zhì)等同性評價
        1.4.3 轉(zhuǎn)基因水稻毒理學(xué)評價
        1.4.4 轉(zhuǎn)基因水稻致敏性評價
    1.5 研究目的及意義
第2章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 供試水稻
        2.1.2 土壤
        2.1.3 外源基因及其表達載體
        2.1.4 主要實驗試劑
        2.1.5 主要實驗儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 Basta抗感性檢測
        2.2.2 PCR檢測
        2.2.3 Real-time PCR檢測
        2.2.4 Bt蛋白檢測
        2.2.5 Southern blot檢測
        2.2.6 農(nóng)藝性狀考察及米質(zhì)檢測
        2.2.7 全基因組重測序
        2.2.8 土壤微生物檢測
第3章 結(jié)果與分析
    3.1 水稻HD_2和HD_4的篩選及PCR檢測
        3.1.1 Basta篩選
        3.1.2 膠體金免疫層析試紙條篩選
        3.1.3 cry2A*基因PCR檢測
    3.2 水稻HD_2和HD_4目的基因表達量
        3.2.1 mRNA
        3.2.2 蛋白質(zhì)
    3.3 水稻HD_2和HD_4目的基因拷貝數(shù)
    3.4 水稻HD_2和HD_4農(nóng)藝性狀及米質(zhì)
    3.5 水稻HD_2和HD_4目的基因插入位點
    3.6 水稻HD_2和HD_4對土壤微生物的影響
        3.6.1 對土壤微生物數(shù)量的影響
        3.6.2 目的基因向土壤微生物的水平擴散
第4章 討論
    4.1 轉(zhuǎn)cry2A*基因早粳稻農(nóng)藝性狀發(fā)生改變的分析
    4.2 種植轉(zhuǎn)基因作物對土壤微生物造成潛在影響的分析
    4.3“綠色超級稻”的培育及后續(xù)實驗的展望
第5章 結(jié)論
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]國家“綠色超級稻新品種選育”現(xiàn)場會召開[J]. 蔡秋華.  福建稻麥科技. 2016(04)
[2]動物基因組學(xué)重測序的應(yīng)用研究進展[J]. 汪文強,趙生國,馬利青,郭繼軍,馬月輝,趙倩君.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2016(10)
[3]基于重測序的大豆新品種齊黃34的全基因組變異挖掘[J]. 張彥威,李偉,張禮鳳,王彩潔,戴海英,徐冉.  中國油料作物學(xué)報. 2016(02)
[4]雙抗夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗影響因素探析[J]. 何莉,孫海,胡松,莫春芬,郭慧杰,賴翼,劉陽,鄒強,羅興燕.  檢驗醫(yī)學(xué)與臨床. 2016(07)
[5]轉(zhuǎn)基因玉米種植對土壤動物的影響[J]. 劉新穎.  北京農(nóng)業(yè). 2016(02)
[6]外源基因在轉(zhuǎn)基因植物中高效表達的研究進展[J]. 韓嵐,張金然,吳娜,張海霞.  北京農(nóng)業(yè). 2015(35)
[7]關(guān)于我國轉(zhuǎn)基因糧食作物商業(yè)化種植問題的思考[J]. 馬翠萍.  價格理論與實踐. 2015(11)
[8]診斷家畜日本血吸蟲感染膠體金免疫層析試紙條的研制[J]. 許瑞,趙登云,陸珂,洪煬,李浩,林矯矯,劉金明,徐玉梅,朱傳剛.  中國血吸蟲病防治雜志. 2015(05)
[9]基于全基因組重測序的SNP分析在作物基因定位中的研究進展[J]. 袁金紅,李俊華,黃小城,李莎,高武軍.  植物生理學(xué)報. 2015(09)
[10]不同植物種植對松嫩平原鹽堿地土壤理化性質(zhì)與細根生長的影響[J]. 魏晨輝,沈光,裴忠雪,任蔓莉,路嘉麗,王瓊,王文杰.  植物研究. 2015(05)

博士論文
[1]抗RBSDV轉(zhuǎn)基因水稻田間生物學(xué)調(diào)查及分子特征分析[D]. 林超.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]蘇云金芽胞桿菌資源多樣性分析與殺蟲基因發(fā)掘[D]. 束長龍.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[3]RNAi介導(dǎo)的棉鈴蟲HaHR3基因沉默及轉(zhuǎn)基因植物抗蟲機理研究[D]. 熊葉輝.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2013
[4]轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究[D]. 張麗.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2012
[5]兩種轉(zhuǎn)基因大米食用安全性的毒理學(xué)研究[D]. 周興華.江蘇大學(xué) 2012



本文編號：3201764