發(fā)布時間：2021-05-20 20:21

　　鳳仙花壞死環(huán)斑病毒（Impatiens necrotic spot virus,INSV）與番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt virus.TSWV）同屬于布尼亞病毒科（Bunyaviridae）,番茄斑萎病毒屬（Tospovirus）。兩者均有廣泛的寄主范圍,西花薊馬（Frankliniella.occidentalis）是它們共同的傳播介體。兩種病毒在侵染植物后的癥狀上有很多的相同之處,主要表現(xiàn)為:植株矮化,莖或葉片上出現(xiàn)環(huán)狀或紫褐色的斑,莖會有腐爛現(xiàn)象,可以出現(xiàn)碎色花等。但是鳳仙花壞死環(huán)斑病毒主要侵染花卉等觀賞植物,而番茄斑萎病毒侵染蔬菜等重要農(nóng)作物,兩種病毒在全世界的大規(guī)模傳播給栽培種植者帶來了巨大的經(jīng)濟損失。為了制備鳳仙花壞死環(huán)斑病毒單克隆抗體,將抗原注射入免疫小鼠體內(nèi),可以使其體內(nèi)的脾細胞具有產(chǎn)生抗體的能力,但這種產(chǎn)生抗體的細胞并不具備癌細胞所具有的無限增殖的能力。如果在融合劑的作用下將兩種能力不同的細胞進行細胞融合形成雜交瘤細胞,就會使其擁有這兩種細胞的能力。再通過篩選得到只分泌我們所需要的抗體的單一 B淋巴細胞,對其單獨進行培養(yǎng),這樣就能獲得單克隆抗體... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學江蘇省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞
緒論
上篇 文獻綜述
    第一章 鳳仙花壞死環(huán)斑病毒的主要概況
        1.1 鳳仙花壞死環(huán)斑病毒的特征
        1.2 鳳仙花壞死環(huán)斑病毒基因組結(jié)構(gòu)和功能
        1.3 INSV的病毒檢測
            1.3.1 傳統(tǒng)生物學方法
            1.3.2 電鏡檢測法
            1.3.3 血清學檢測方法
            1.3.4 分子生物學檢測方法
        1.4 INSV的危害與防治
    第二章 番茄斑萎病毒的主要概況
        2.1 番茄斑萎病毒生物學特性
        2.2 病毒粒子特性
        2.3 TSWV的檢測方法
            2.3.1 電鏡檢測方法
            2.3.2 血清學檢測方法
            2.3.3 分子生物學檢測方法
        2.4 TSWV的防治
    第三章 單克隆抗體的研究概況
        3.1 單克隆抗體技術(shù)的定義與背景
        3.2 單克隆抗體技術(shù)的原理
        3.3 單克隆抗體的制備過程
            3.3.1 動物免疫
            3.3.2 骨髓瘤細胞的飼養(yǎng)
            3.3.3 細胞融合
            3.3.4 選擇性培養(yǎng)
            3.3.5 雜交瘤細胞的選擇培養(yǎng)與篩選
            3.3.6 單克隆抗體的大量制備
            3.3.7 單克隆抗體的純化
        3.4 單克隆抗體的優(yōu)勢與應用
            3.4.1 單克隆抗體的研究現(xiàn)狀
                3.4.1.1 鼠源性單抗
                3.4.1.2 嵌合抗體
                3.4.1.3 人源化抗體
                3.4.1.4 人源性抗體
            3.4.2 單克隆抗體的應用與前景展望
                3.4.2.1 單克隆抗體的優(yōu)勢
                3.4.2.2 單克隆抗體的應用
                3.4.2.3 單克隆抗體所面臨的問題
                3.4.2.4 單克隆抗體的前景展望
下篇 研究內(nèi)容
    第四章 鳳仙花壞死環(huán)斑病毒單克隆抗體制備
        4.1 實驗材料
            4.1.1 細胞與免疫動物
            4.1.2 試劑
            4.1.3 主要儀器
        4.2 方法
            4.2.1 構(gòu)建抗原載體
                4.2.1.1 提取病毒RNA
                4.2.1.2 載體構(gòu)成
                4.2.1.3 轉(zhuǎn)化
                4.2.1.4 篩選陽性克隆
                4.2.1.5 提取質(zhì)粒并進行測序
            4.2.2 免疫抗原的獲取
                4.2.2.1 原核表達
                4.2.2.2 SDS-PAGE電泳
                4.2.3.3 蛋白質(zhì)透析
            4.2.3 小鼠免疫
            4.2.4 小鼠尾血效價的測定
            4.2.5 細胞融合
                4.2.5.1 SP2/0的復蘇與飼養(yǎng)
                4.2.5.2 飼養(yǎng)細胞的制備
                4.2.5.3 免疫脾細胞的制備
                4.2.5.4 細胞融合
            4.2.6 融合后細胞的選擇性培養(yǎng)
            4.2.7 單克隆細胞株的篩選
            4.2.8 陽性雜交瘤細胞株的克隆化
            4.2.9 陽性雜交瘤細胞株的建立
            4.2.10 雜交瘤細胞株的凍存與復蘇
            4.2.11 小鼠腹水抗體的制備與純化
            4.2.12 純化后抗體效價的檢測
        4.3 結(jié)果
            4.3.1 INSV免疫抗原重組蛋白原核表達和純化
            4.3.2 小鼠尾血效價的測定
            4.3.3 單克隆抗體細胞株的建立
            4.3.4 對純化后的單克隆抗體進行效價測定
                4.3.4.1 1E1細胞株系效價的測定
                4.3.4.2 2D9細胞株系效價的測定
        4.4 討論
        4.5 結(jié)論
    第五章 番茄斑萎病毒云南樣品的田間診斷
        5.1 材料
            5.1.1 主要試劑
            5.1.2 主要儀器
        5.2 方法
            5.2.1 TSWV的摩擦接種
            5.2.2 DOT-ELISA法檢測 TSWV
            5.2.3 RT-PCR技術(shù)檢測TSWV
        5.3 結(jié)果
            5.3.1 TSWV的田間采樣
            5.3.2 毒源的保存與摩擦接種到本氏煙
            5.3.3 血清學檢測方法
            5.3.4 分子生物學檢測方法
            5.3.5 INSV單克隆抗體檢測TSWV
        5.4 討論
        5.5 結(jié)論
全文總結(jié)
創(chuàng)新點
參考文獻
附錄
致謝
碩士期間參與發(fā)表的研究論文


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3198378