柑橘全爪螨Panonychus citri（McGregor）是一種世界性分布的多食性害螨,在我國主要柑橘產(chǎn)區(qū)為害嚴重,且對多種殺螨劑產(chǎn)生了不同程度的抗性。羧酸酯酶（Carboxylesterases,CarEs,3.1.1.1）是一類重要的解毒代謝酶,其對殺蟲（螨）劑代謝作用的增強是導(dǎo)致昆蟲（螨）產(chǎn)生抗藥性的重要原因之一。增效劑研究發(fā)現(xiàn),羧酸酯酶專一性抑制劑磷酸三苯酯（TPP）顯著提高甲氰菊酯對柑橘全爪螨的毒殺作用,暗示羧酸酯酶參與柑橘全爪螨對甲氰菊酯的解毒代謝作用。在前期羧酸酯酶基因鑒定的基礎(chǔ)上,結(jié)合實時熒光定量PCR技術(shù)解析了柑橘全爪螨11個羧酸酯酶基因的時空表達模式,篩選出甲氰菊酯解毒代謝的相關(guān)基因PcE1、PcE7與PcE9。在此基礎(chǔ)上,基于Bac-to-Bac真核表達系統(tǒng),結(jié)合反向遺傳學(xué)手段RNAi,深入探究了PcE1、PcE7與Pc E9基因在甲氰菊酯解毒代謝中的作用,以期為柑橘全爪螨抗藥性的田間治理提供理論指導(dǎo)。本研究主要結(jié)果如下:1羧酸酯酶特異性抑制劑對甲氰菊酯的增效作用以柑橘全爪螨北碚種群為研究對象,采用葉碟浸漬法,測定了羧酸酯酶專一性抑制劑TPP對甲氰菊酯的增效作... 

【文章來源】：西南大學(xué)重慶市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1 柑橘全爪螨為害現(xiàn)狀及抗性問題
    2 昆蟲（螨）抗性機理
    3 羧酸酯酶及其介導(dǎo)的昆蟲（螨）抗藥性
        3.1 羧酸酯酶的分類
        3.2 羧酸酯酶介導(dǎo)昆蟲（螨）抗藥性產(chǎn)生的作用機制
    4 昆蟲桿狀病毒表達系統(tǒng)及其在基因功能研究中的應(yīng)用
    5 RNA干擾技術(shù)及其在基因功能研究中的應(yīng)用
引言
第二章 TPP對甲氰菊酯的增效作用研究
    1 材料與方法
        1.1 供試螨源
        1.2 主要儀器與試劑
        1.3 試驗方法
    2 結(jié)果與分析
    3 小結(jié)
第三章 柑橘全爪螨羧酸酯酶基因時空表達模式解析
    1 材料與方法
        1.1 供試螨源
        1.2 主要試劑及儀器
        1.3 試螨處理
        1.4 總RNA提取
        1.5 第一鏈cDNA合成
        1.6 定量PCR引物設(shè)計
        1.7 定量PCR
        1.8 數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 柑橘全爪螨羧酸酯酶基因在北碚種群的表達模式
        2.2 柑橘全爪螨羧酸酯酶基因在奉節(jié)種群的表達模式
        2.3 柑橘全爪螨羧酸酯酶基因在萬州種群的表達模式
        2.4 甲氰菊酯脅迫后柑橘全爪螨羧酸酯酶基因的表達模式解析
    3 小結(jié)
第四章 柑橘全爪螨羧酸酯酶基因的真核表達研究
    1 材料與方法
        1.1 主要試劑及儀器
        1.2 細胞培養(yǎng)
        1.3 PCR擴增及pMD-19T Simple載體構(gòu)建
        1.4 桿狀病毒表達載體構(gòu)建
        1.5 細胞轉(zhuǎn)染及病毒株獲取
        1.6 PcE1、PcE7和PcE9重組蛋白表達
        1.7 PcE1、PcE7和PcE9表達產(chǎn)物酶活性測定
        1.8 羧酸酯酶活性測定
        1.9 細胞毒性測定
    2 結(jié)果與分析
        2.1 PCR擴增及pMD-19T Simple載體構(gòu)建
        2.2 pFastBac- PcEs重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.3 Bacmid- PcEs重組桿粒的構(gòu)建
        2.4 重組桿粒對昆蟲細胞的轉(zhuǎn)染
        2.5 PcE1、PcE7和PcE9重組蛋白的酶活性測定
        2.6 細胞毒性測定
    3 小結(jié)
第五章 基于RNAi的柑橘全爪螨羧酸酯酶基因功能分析
    1 材料與方法
        1.1 供試蟲源
        1.2 主要試劑及儀器
        1.3 dsRNA引物設(shè)計
        1.4 dsRNA合成
        1.5 dsRNA檢測
        1.6 RNAi處理
        1.7 沉默效率的檢測
        1.8 生物測定
    2 結(jié)果與分析
        2.1 dsRNA合成
        2.2 沉默效率檢測
        2.3 甲氰菊酯生物測定
    3 小結(jié)
第六章 主要結(jié)果及研究展望
    1 主要結(jié)果
    2 研究展望
參考文獻
在讀期間發(fā)表論文情況
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]飛蝗β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶基因的表達及酶學(xué)特性分析[J]. 宋慧芳,李應(yīng)龍,馬恩波,張建珍.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2016(21)
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[3]飛蝗羧酸酯酶基因LmCesF1的時空表達及與殺蟲劑耐受性的關(guān)系[J]. 張建琴,葛娉婷,李大琪,王燕,張建珍,馬恩波.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(08)
[4]甜菜夜蛾UAP的克隆、時空表達及RNAi研究[J]. 陳潔,陳宏鑫,姚瓊,張文慶.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(07)
[5]截形葉螨抗噠螨靈品系和敏感品系體內(nèi)解毒酶活性的變化[J]. 宋麗雯,沈一凡,岳秀利,郭金梅,沈慧敏.  昆蟲學(xué)報. 2014(03)
[6]柑橘全爪螨兩個田間種群抗性監(jiān)測及羧酸酯酶生化特性研究[J]. 張昆,丁天波,楊爵銘,豆威,王進軍.  應(yīng)用昆蟲學(xué)報. 2013(02)
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博士論文
[1]飛蝗羧酸酯酶基因轉(zhuǎn)錄組分析及殺蟲劑解毒功能研究[D]. 張建琴.山西大學(xué) 2014
[2]柑橘全爪螨細胞色素P450及其相關(guān)基因的鑒定和表達模式研究[D]. 丁天波.西南大學(xué) 2014
[3]二斑葉螨對甲氰菊酯的抗性分子機理研究[D]. 高新菊.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[4]棉鈴蟲羧酸酯酶表達及解毒作用研究[D]. 李永強.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2012

碩士論文
[1]山楂葉螨的抗藥性監(jiān)測及其對噠螨靈和阿維菌素的抗性機理研究[D]. 彭麗娟.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2015
[2]棉鈴蟲羧酸酯酶基因克隆及原核表達[D]. 吳美玲.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2014
[3]朱砂葉螨羧酸酯酶基因TCE2原核表達研究[D]. 王祥尊.西南大學(xué) 2014
[4]家蠶羧酸酯酶Bmbe2基因的克隆及功能研究[D]. 張作旺.重慶大學(xué) 2014
[5]柑桔全爪螨羧酸酯酶CarEs生化及分子毒理學(xué)特性研究[D]. 張昆.西南大學(xué) 2013
[6]朱砂葉螨酯酶基因克隆及其mRNA表達研究[D]. 薛傳華.西南大學(xué) 2008



本文編號：3193568