柑桔黃龍�。–itrus20Huanglongbing）是制約全球柑桔產(chǎn)業(yè)發(fā)展的毀滅性病害。柑桔黃龍病病原菌為變形菌門Proteobacteria變形菌綱α-亞綱韌皮部桿菌屬Candidatus20Liberibacter20app.,屬于革蘭氏陰性細(xì)菌,專生于植物韌皮部組織。至今還未能獲得純化培養(yǎng),柑桔黃龍病的致病機(jī)理以及有效防控一直以來難有顯著的突破。植物內(nèi)細(xì)菌多樣性及動態(tài)規(guī)律會隨宿主植物生理而改變,而一種病原菌的出現(xiàn)往往導(dǎo)致不同程度的菌群失衡或微生態(tài)失調(diào)。由于絕大多數(shù)植物細(xì)菌群落也存在無法分離培養(yǎng)難題,所以目前關(guān)于柑桔被黃龍病病原菌侵染后細(xì)菌多樣性所知甚少。為了探索黃龍病病原菌侵染柑桔后的菌群多樣性變化,開展以下相關(guān)研究工作:1)選取已發(fā)表的黃龍病特異性引物,并篩選出靈敏度最高的引物;2)利用篩選出特異性引物鑒定健康和感染黃龍病的砂糖桔樣品;3)利用高通量測序和生物信息學(xué)比較分析健康和感病沙糖桔的菌群多樣性。具體的研究內(nèi)容與研究結(jié)果如下:1)柑桔黃龍病高靈敏度的引物篩選從已有文獻(xiàn)報道的3對柑桔黃龍病PCR檢測引物作為候選引物。在相同模板、擴(kuò)增條件下,引物P1/P2的PCR結(jié)果顯示... 

【文章來源】：仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院廣東省

【文章頁數(shù)】：101 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 柑桔黃龍病
        1.1.1 柑橘黃龍病的研究背景
        1.1.2 柑桔黃龍病癥狀
        1.1.3 柑桔黃龍病病原
        1.1.4 柑桔黃龍病病原的寄主種類
    1.2 柑桔黃龍病檢測方法
        1.2.1 柑桔黃龍病的傳統(tǒng)檢測方法
        1.2.2 柑桔黃龍病的分子生物學(xué)檢測方法
    1.3 柑桔黃龍病防控技術(shù)
        1.3.1 抗病育種
        1.3.2 苗木脫毒
        1.3.3 化學(xué)防治技術(shù)
        1.3.4 物理防治技術(shù)
        1.3.5 生物防治技術(shù)
    1.4 目的意義、研究內(nèi)容與技術(shù)路線
        1.4.1 目的意義
        1.4.2 研究內(nèi)容
        1.4.3 技術(shù)路線
第二章 砂糖桔的柑桔黃龍病檢測
    2.1 材料與方法
        2.1.1 供試材料與主要試劑儀器
        2.1.2 砂糖桔樣品基因組總DNA提取
        2.1.3 不同引物檢測黃龍病的靈敏性比較
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 砂糖桔基因組DNA抽提結(jié)果
        2.2.2 3對引物的靈敏度分析
        2.2.3 OI1/OI2c的分子檢測分析
    2.3 總結(jié)與討論
第三章 健康和感染黃龍病砂糖桔細(xì)菌多樣性比較分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 供試材料與主要試劑儀器
        3.1.2 樣品16SrDNA文庫構(gòu)建及質(zhì)量檢測
        3.1.3 上機(jī)測序
        3.1.4 下機(jī)數(shù)據(jù)處理
        3.1.5 微生物操作分類單元（operational taxonomic unit,OTU）劃分及物種群落分析
        3.1.6 Alpha Diversity分析
        3.1.7 Beta Diversity分析
        3.1.8 樣品組間性統(tǒng)計分析
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 16SrDNA文庫構(gòu)建及質(zhì)量檢測結(jié)果
        3.2.2 數(shù)據(jù)的預(yù)處理
        3.2.3 OTU及物種群落分析
        3.2.4 Alpha Diversity分析
        3.2.5 Beta Diversity分析
        3.2.6 樣品組間統(tǒng)計分析
    3.3 總結(jié)與討論
第四章 結(jié)論與展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄A 屬水平的組間物種顯著性差異統(tǒng)計表
附錄B OTUS差異統(tǒng)計表
攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]淺談柑橘黃龍病檢疫防控對策[J]. 馮小龍,何世忠,唐仙壽,劉永華,吳佳徽.  中國植保導(dǎo)刊. 2016(03)
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[3]基于調(diào)制熒光檢測技術(shù)的柑橘黃龍病診斷[J]. 鄧小玲,林亮生,蘭玉彬.  華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2016(02)
[4]海南柑橘黃龍病PCR檢測分析[J]. 楊毅,車海彥,曹學(xué)仁,陳旺,羅大全.  甘肅農(nóng)業(yè). 2015(24)
[5]柑橘黃龍病病原的研究進(jìn)展及病株的簡易鑒定[J]. 黃小耘,田甜.  東南園藝. 2015(06)
[6]柑橘黃龍病熱處理防治技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 賈志成,鄭加強(qiáng),黃雅杰,周宏平,Ehsani Reza.  農(nóng)業(yè)工程學(xué)報. 2015(23)
[7]種子傳播黃龍病可能性研究[J]. 宋雅琴,婁兵海,白先進(jìn),鄧崇嶺,陳宜超,趙小龍,李賢良.  南方農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2015(05)
[8]柑橘黃龍病菌外膜蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)[J]. 高玉霞,盧占軍,鐘八蓮,易龍,蘇華楠,趙培婭,劉志芳,賴愛萍,夏宜林.  贛南師范學(xué)院學(xué)報. 2014(06)
[9]柑橘花器和種子中黃龍病菌的定量分布及應(yīng)用[J]. 婁兵海,宋雅琴,趙小龍,白先進(jìn),鄧崇嶺.  植物保護(hù)學(xué)報. 2014(04)
[10]柑橘黃龍病可視化LAMP檢測技術(shù)的建立及應(yīng)用[J]. 王賢達(dá),林雄杰,胡菡青,王宗華,范國成.  熱帶作物學(xué)報. 2014(05)

博士論文
[1]中國柑橘黃龍病病原調(diào)查、種群遺傳分化及其原噬菌體溶菌酶蛋白原核表達(dá)[D]. 蘇華楠.西南大學(xué) 2013

碩士論文
[1]HLB感染柑桔韌皮部內(nèi)生細(xì)菌區(qū)系的研究[D]. 王愛華.重慶大學(xué) 2010



本文編號：3175881