課題組前期報道了細菌在線蟲捕食壓力下,通過快速上調(diào)精氨酸酶產(chǎn)生尿素,誘導少孢節(jié)叢孢產(chǎn)生捕器來捕食線蟲。本論文通過轉(zhuǎn)錄組測序和Real time PCR技術(shù)篩選尿素誘導少孢節(jié)叢孢產(chǎn)生捕器候選基因,初步挖掘尿素誘導少孢節(jié)叢孢產(chǎn)生捕器的基因。通過對尿素循環(huán)中精氨酸酶基因Arg1進行敲除及回復突變,鑒定該基因的功能。此外,本論文利用根癌農(nóng)桿菌介導的遺傳轉(zhuǎn)化（ATMT）篩選了少孢節(jié)叢孢中的T-DNA隨機插入突變體。研究結(jié)果如下:1.通過對尿素誘導捕器產(chǎn)生不同時期的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的分析,發(fā)現(xiàn)與菌絲萌發(fā)M期相比,粘性網(wǎng)形成TⅠ期和成熟TⅡ期的轉(zhuǎn)錄水平發(fā)生了非常顯著的變化。利用DESeq軟件進行粘性網(wǎng)與菌絲的差異基因篩選,粘性網(wǎng)形成T1期得到1970個差異基因,主要集中在RNA降解途徑、丙氨酸,天冬氨酸和谷氨酸代謝及其他氨基酸和抗體的生物合成通路;粘性網(wǎng)形成T2期得到2665個差異基因,主要集中在氨基酸的生物合成途徑、RNA降解及次級代謝產(chǎn)物途徑。2.利用基因敲除技術(shù)敲除了少孢節(jié)叢孢中精氨酸酶基因Argl（AOL-s00083g426r）并對敲除基因進行回復突變,得到兩個突變株△Arg1-26、△Arg1... 

【文章來源】：云南大學云南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1. 植物病原線蟲的危害與防治
    2. 捕食線蟲真菌的研究
        2.1 食線蟲真菌的多樣性
        2.2 捕食線蟲真菌捕器的多樣性
    3. 捕食線蟲真菌產(chǎn)生捕器的誘導因子
        3.1 非氮源相關(guān)因子
        3.2 氮源相關(guān)因子
    4. 本論文的選題依據(jù)和研究意義
第二章 尿素誘導少孢節(jié)叢孢產(chǎn)生捕器的轉(zhuǎn)錄組學研究
    1. 前言
    2. 實驗材料和儀器
        2.1 實驗材料
        2.2 實驗培養(yǎng)基
        2.3 實驗試劑及儀器
    3. 實驗方法
        3.1 誘導培養(yǎng)基,誘導濃度及誘導時間的確定
        3.2 高通量測序樣品的制備
        3.3 RNA-Seq
        3.4 熒光定量PCR
    4. 實驗結(jié)果與分析
        4.1 誘導培養(yǎng)基及濃度的篩選
        4.2 誘導時間的確定
        4.3 RNA質(zhì)量檢測
        4.4 轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析
        4.5 熒光定量結(jié)果
    5. 小結(jié)與討論
第三章 少孢節(jié)叢孢中精氨酸酶基因功能的初步研究
    1. 前言
    2. 實驗材料和方法
        2.1 實驗所用菌株和質(zhì)粒
        2.2 實驗培養(yǎng)基及相關(guān)緩沖液
        2.3 實驗所需試劑及儀器
    3. 實驗方法
        3.1 基因的序列分析
        3.2 基因敲除技術(shù)路線
        3.3 引物設計
        3.4 少孢節(jié)叢孢全基因組DNA的提取
        3.5 pCSN44質(zhì)粒的提取
        3.6 pRS426質(zhì)粒的提取
        3.7 少孢節(jié)叢孢尿素轉(zhuǎn)運相關(guān)基因同源重組載體的構(gòu)建
        3.8 目的基因全長片段的制備
        3.9 少孢節(jié)叢孢原生質(zhì)體的制備及轉(zhuǎn)化
        3.10 少孢節(jié)叢孢相關(guān)基因的回復突變的研究
    4. 實驗結(jié)果
        4.1 少孢節(jié)叢孢中相關(guān)基因的序列分析
        4.2 基因同源重組載體的制備
        4.3 轉(zhuǎn)化子的篩選及PCR驗證
        4.4 回復突變的研究
    5. 小結(jié)與討論
第四章 少孢節(jié)叢孢突變體庫的構(gòu)建
    1. 前言
    2. 實驗材料與儀器
        2.1 實驗菌株及質(zhì)粒
        2.2 實驗培養(yǎng)基及相關(guān)緩沖液
        2.3 實驗所需試劑及儀器
    3. 實驗方法
        3.1 少孢節(jié)叢孢的活化
        3.2 引物設計
        3.3 載體的構(gòu)建
        3.4 農(nóng)桿菌的化學轉(zhuǎn)化
        3.5 突變體的篩選
        3.6 共培養(yǎng)條件的篩選
    4. 實驗結(jié)果與分析
        4.1 載體的構(gòu)建
        4.2 農(nóng)桿菌的化學轉(zhuǎn)化
        4.3 突變體的篩選
        4.4 轉(zhuǎn)化子的PCR驗證
    5. 小結(jié)與討論
第五章 少孢節(jié)叢孢野生型菌株與幾株突變株的比較
    1. 前言
    2. 實驗材料及儀器
        2.1 實驗菌株
        2.2 主要培養(yǎng)基
        2.3 實驗藥品
        2.4 實驗儀器
    3. 實驗方法
        3.1 在不同培養(yǎng)基上生長速率的比較
        3.2 抗逆性的比較
        3.3 產(chǎn)孢數(shù)量及形態(tài)的比較
        3.4 產(chǎn)捕器能力的比較
    4. 實驗結(jié)果
        4.1 不同培養(yǎng)基上生長速率的比較
        4.2 抗逆性的比較
        4.3 產(chǎn)孢數(shù)量的比較
        4.4 產(chǎn)生捕器能力的比較
    5. 小結(jié)與討論
        5.1 突變株和野生株在生長速率、抗逆性方面的比較
        5.2 產(chǎn)孢比較
        5.3 產(chǎn)捕器的比較
全文總結(jié)
附錄
參考文獻
碩士研究生期間科研成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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[3]根癌農(nóng)桿菌介導的輪枝鐮孢菌遺傳轉(zhuǎn)化及T-DNA插入突變體的篩選[J]. 趙培寶,周慶新,任愛芝,李多川.  菌物學報. 2008(02)
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博士論文
[1]細菌調(diào)控捕食線蟲真菌捕殺線蟲的分子機制[D]. 王芯.云南大學 2015

碩士論文
[1]氨基酸誘導寡孢節(jié)叢孢形成捕食器官的條件和機制初步研究[D]. 蘇浩.云南大學 2015
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本文編號：3155506