發(fā)布時間：2021-04-20 06:22

　　[目的]本文旨在使用Mate&Plate^TM技術(shù)構(gòu)建簇毛麥?zhǔn)馨追劬T導(dǎo)的酵母雙雜交文庫,鑒定正向調(diào)節(jié)小麥白粉病抗性的簇毛麥E3泛素連接酶蛋白CMPG1-Ⅴ的互作蛋白,為解析其抗病性機制奠定基礎(chǔ)。[方法]提取白粉菌誘導(dǎo)前及誘導(dǎo)后1、2、4、6、12、24和48 h的簇毛麥葉片總RNA,利用SMART技術(shù)分離純化mRNA,合成ds cDNA,將ds cDNA和pGADT7-Rec載體共同轉(zhuǎn)入酵母菌株Y187,構(gòu)建簇毛麥酵母雙雜交文庫,明確文庫插入片段大小和滴度。以CMPG1-Ⅴ為誘餌篩選文庫,并對部分互作蛋白進行了回補驗證,利用BiFC方法驗證CMPG1-Ⅴ與篩選到的1個互作蛋白CMIN6（MYB25-V）的體內(nèi)互作。[結(jié)果]成功構(gòu)建了受白粉菌誘導(dǎo)的簇毛麥葉片酵母雙雜交文庫,文庫滴度為9.5×10⁷ CFU·mL^-1,插入片段長度為250～2 000 bp,重組率為100%。以CMPG1-Ⅴ為誘餌篩選文庫,獲得79個互作蛋白,挑選其中10個互作蛋白進行回補驗證。通過BiFC試驗驗證了CMPG1-Ⅴ與MYB25-V的體... 

【文章來源】：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2020,43(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：11 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 植物材料及處理方法
    1.2 菌株和載體
    1.3 主要試劑
    1.4 總RNA提取和mRNA分離
    1.5 酵母雙雜交cDNA文庫的構(gòu)建
    1.6 庫容量及重組率和插入片段長度的鑒定
    1.7 誘餌載體的構(gòu)建及自激活檢測
    1.8 CMPG1-V互作蛋白的篩選及回補驗證
    1.9 雙分子熒光互補（BiFC）試驗
    1.10 基因表達分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 簇毛麥總RNA提取、mRNA純化和ds cDNA的合成
    2.2 簇毛麥酵母雙雜交文庫的構(gòu)建及評價
    2.3 以CMPG1-V為誘餌篩選簇毛麥cDNA文庫
    2.4 部分互作蛋白的回補驗證
    2.5 CMPG1-V與CMIN6體內(nèi)互作分析
    2.6 MYB25-V受白粉菌誘導(dǎo)表達分析
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3149152