由農(nóng)業(yè)病原菌引起的一系列農(nóng)業(yè)災(zāi)害嚴(yán)重威脅我國(guó)糧食生產(chǎn)安全,導(dǎo)致巨大的經(jīng)濟(jì)損失。微生物源生物農(nóng)藥因?yàn)榫哂械投拘?環(huán)境友好性等優(yōu)點(diǎn)而受到越來(lái)越多的關(guān)注。作為世界上最大的生態(tài)系統(tǒng),海洋環(huán)境中蘊(yùn)含著多樣的微生物和活性物質(zhì),為新型生物農(nóng)藥前體的開(kāi)發(fā)提供了豐富的候選資源。因此,本研究擬開(kāi)展兩個(gè)方面的研究,一方面以病原細(xì)菌鰻弧菌和病原真菌煙草黑脛病菌為研究對(duì)象;另一方面,以病原真菌稻瘟病菌為研究對(duì)象,篩選拮抗這些病原菌的海洋細(xì)菌及其活性產(chǎn)物,并利用蛋白組學(xué)和分子生物學(xué)等技術(shù)研究其抗菌機(jī)理。吩嗪及其衍生物是由假單胞菌所產(chǎn)生的非常重要的次級(jí)代謝產(chǎn)物,并且具有廣譜的拮抗細(xì)菌和真菌的活性。但是直到現(xiàn)在,有關(guān)來(lái)自海洋環(huán)境的假單胞菌及其吩嗪類(lèi)產(chǎn)物卻鮮有報(bào)道。在本研究中,一株具有拮抗病原細(xì)菌的海洋源細(xì)菌Pseudomonas aeruginosa PA31x被分離出來(lái),該菌株可以抑制水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中危害最嚴(yán)重的病原細(xì)菌之一鰻弧菌（Vibrio anguillarum）的生長(zhǎng)。利用高分辨率質(zhì)譜以及核磁共振圖譜分析了該菌株所產(chǎn)的功能性產(chǎn)物,將該活性產(chǎn)物鑒定為吩嗪類(lèi)重要的衍生物,吩嗪-1-羧酸（PCA）。結(jié)合基因克隆等分子... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)科學(xué)院大學(xué)(中國(guó)科學(xué)院海洋研究所)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：114 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 引言
    1.2 稻瘟病菌研究概況
        1.2.1 稻瘟病菌的生物學(xué)特征
        1.2.2 稻瘟病菌致病特性
        1.2.3 稻瘟病菌的生物防治
    1.3 鰻弧菌研究概況
        1.3.1 鰻弧菌致病機(jī)理概況
        1.3.2 鰻弧菌生物防治
    1.4 海洋來(lái)源的微生物活性物質(zhì)
    1.5 微生物生防菌株的研究概況
        1.5.1 生防假單胞菌研究進(jìn)展
        1.5.2 生防芽孢桿菌研究進(jìn)展
        1.5.3 其他生防菌株的研究進(jìn)展
    1.6 研究?jī)?nèi)容和意義
第二章 實(shí)驗(yàn)材料
    2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備
第三章 拮抗鰻弧菌C312的海洋細(xì)菌的篩選和抗菌機(jī)理初步研究.
    3.1 前言
    3.2 實(shí)驗(yàn)菌株和培養(yǎng)基
        3.2.1 菌株
        3.2.2 培養(yǎng)基
    3.3 實(shí)驗(yàn)材料
    3.4 實(shí)驗(yàn)方法
        3.4.1 拮抗鰻弧菌C312的海洋來(lái)源菌株篩選及鑒定
        3.4.2 活性產(chǎn)物的分離,純化和結(jié)構(gòu)鑒定
        3.4.3 PCA生物合成基因簇分析
        3.4.4 PCA拮抗鰻弧菌C312的MIC和IC50值測(cè)定
        3.4.5 PCA對(duì)煙草黑脛病菌生長(zhǎng)的抑制作用
        3.4.6 PCA拮抗鰻弧菌C312形態(tài)學(xué)變化的SEM觀察
        3.4.7 PCA拮抗鰻弧菌C312形態(tài)學(xué)變化的TEM觀察
        3.4.8 SEM觀察PCA拮抗煙草黑脛病菌形態(tài)學(xué)變化
        3.4.9 TEM觀察PCA拮抗煙草黑脛病菌形態(tài)學(xué)變化
        3.4.10 PCA對(duì)鰻弧菌C312和肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549胞內(nèi)ROS的影響
        3.4.11 PCA抑制鰻弧菌C312對(duì)斑馬魚(yú)卵發(fā)育的感染
        3.4.12 PCA拮抗煙草黑脛病菌的溫室防控實(shí)驗(yàn)
        3.4.13 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.5.1 拮抗鰻弧菌C312海洋細(xì)菌的分離和鑒定
        3.5.2 P.aeruginosa PA31x活性產(chǎn)物的分離純化
        3.5.3 P.aeruginosa PA31x活性產(chǎn)物的核磁共振分析
        3.5.4 PCA對(duì)鰻弧菌C312菌株的MIC和IC50值檢測(cè)
        3.5.5 P.aeruginosa PA31x菌株合成PCA的基因簇分析
        3.5.6 電鏡觀察PCA對(duì)鰻弧菌C312和煙草黑脛病菌形態(tài)學(xué)變化的影響
        3.5.7 PCA誘導(dǎo)鰻弧菌C312和肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549胞內(nèi)ROS的積累
        3.5.8 PCA降低鰻弧菌C312對(duì)斑馬魚(yú)卵的侵染
        3.5.9 PCA防控?zé)煵莺诿劜【臏厥覍?shí)驗(yàn)
    3.6 結(jié)果討論
第四章 海洋芽孢桿菌源豐原素的分離純化及其抗稻瘟病菌的分子機(jī)理研究
    4.1 前言
    4.2 實(shí)驗(yàn)菌株和培養(yǎng)基
        4.2.1 菌株
        4.2.2 培養(yǎng)基
    4.3 實(shí)驗(yàn)材料
    4.4 實(shí)驗(yàn)方法
        4.4.1 抗菌活性菌株的分離和鑒定
        4.4.2 活性物質(zhì)的分離、純化和結(jié)構(gòu)鑒定
        4.4.3 B.subtilis BS155菌株的全基因組測(cè)序
        4.4.4 稻瘟病菌菌絲體的制備
        4.4.5 fengycin BS155對(duì)稻瘟病菌的致死性和細(xì)胞完整性檢測(cè)
        4.4.6 SEM觀察fengycin BS155處理的稻瘟病菌菌絲細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化
        4.4.7 TEM觀察fengycin BS155處理的稻瘟病菌菌絲細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化
        4.4.8 Fengycin BS155處理的稻瘟病菌菌絲蛋白組學(xué)分析
        4.4.9 稻瘟病菌菌絲ROS和MMP的檢測(cè)
        4.4.10 稻瘟病菌菌絲的SOD和CAT酶活檢測(cè)
        4.4.11 稻瘟病菌菌絲DNA皺縮的檢測(cè)
        4.4.12 稻瘟病菌菌絲基因熒光定量（qRT-PCR）分析
        4.4.13 稻瘟病菌菌絲Western Blot檢測(cè)
    4.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.5.1 菌株BS155及其代謝產(chǎn)物對(duì)稻瘟病菌生長(zhǎng)的抑制作用
        4.5.2 BS155菌株的鑒定
        4.5.3 B.subtilis BS155活性產(chǎn)物的分離和鑒定
        4.5.4 B.subtilis BS155全基因組測(cè)序
        4.5.5 豐原素生物合成相關(guān)基因分析
        4.5.6 Fengycin BS155對(duì)稻瘟病菌菌絲亞顯微結(jié)構(gòu)的影響
        4.5.7 Fengycin BS155拮抗稻瘟病菌的蛋白組學(xué)分析
        4.5.8 Fengycin BS155對(duì)稻瘟病菌的致死性和細(xì)胞完整性影響
        4.5.9 Fengycin BS155誘導(dǎo)稻瘟病菌菌絲細(xì)胞內(nèi)ROS的積累
        4.5.10 Fengycins BS155誘導(dǎo)稻瘟病菌菌絲細(xì)胞內(nèi)染色體的損傷
        4.5.11 Fengycin BS155抑制稻瘟病生長(zhǎng)模式圖
    4.6 結(jié)果討論
全文總結(jié)和創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷及攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文和研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3149145