我國(guó)每年需進(jìn)口大量草坪草和牧草種子,而草種攜帶的部分病原真菌對(duì)種子發(fā)芽、種苗活力具有一定負(fù)作用,嚴(yán)重影響農(nóng)業(yè)發(fā)展。因此,對(duì)其進(jìn)行快速檢測(cè)鑒定以及系統(tǒng)研究極其重要。本研究比較了3種基因組DNA提取方法,進(jìn)一步利用高通量測(cè)序技術(shù)分析了來(lái)源于不同國(guó)家的4份多年生黑麥草（Lolium perenne）和5份白三葉（Trifolium repens）種子攜帶真菌的多樣性,并將其與傳統(tǒng)分離鑒定結(jié)果進(jìn)行了比較;同時(shí)基于DNA條形碼技術(shù)對(duì)重要植物病原真菌鐮刀菌（Fusarium spp.）進(jìn)行快速檢測(cè)鑒定研究。主要研究結(jié)果如下:1.采用CTAB法、尿素法和試劑盒法3種方法提取基因組DNA,比較分析各方法的提取效率。結(jié)果表明,尿素法提取的基因組OD260/280值接近于1.80,蛋白質(zhì)抽提效果較好,含雜質(zhì)較少,濃度最高達(dá)到886.5 ng·μL-1,電泳檢測(cè)結(jié)果條帶明亮單一、無(wú)拖尾現(xiàn)象,完成過(guò)程步驟少、耗時(shí)短,優(yōu)于其他2種方法。2.利用高通量測(cè)序技術(shù)分析了來(lái)源于不同國(guó)家的4份多年生黑麥草（L.perenne）和5份白三葉（T.repens）種子攜帶真菌的多樣性。結(jié)果表明,不同來(lái)源種子攜帶真菌差異較大,主... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

PDA培養(yǎng)基煙曲霉A.fumigatus、黑曲霉A.niger和土曲霉A.terreus形態(tài)特征

圖 2-2 PDA 培養(yǎng)基鏈格孢 A. alternata 和感染鏈格孢 A. infectoria 形態(tài)特征注：圖片第一列為菌落正面、第二列為菌落反面、第三列為 400 顯微鏡下照片，第一行為A. alternata 形態(tài)特征，第二行為 A. infectoria 形態(tài)特征。枝狀枝孢 C. cladosporioides，在 25℃條件下 PDA 培養(yǎng)基上生長(zhǎng) 14 d 后菌落直徑 50 mm，菌落深綠色，具有較粗的褶皺，背面墨綠色，分生孢子簇生，橢圓形至梭型，平均大小為 5.6×3.5 μm。極細(xì)枝孢 C. tenuissimum，在 25℃條件下 PDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng) 14 d 后菌落直徑 41 mm，菌落深綠色，具有較細(xì)的褶皺，背面墨綠色，分生孢子梗單生、直立、有隔膜，分生孢子為鏈生，橢圓形或近球形，直徑范圍為 3.0～5.0 μm(圖 2-3)。

圖 2-3 PDA 培養(yǎng)基枝狀枝孢 C. cladosporioides、極細(xì)枝孢 C. tenuissimum 形態(tài)特征注：圖片第一列為菌落正面、第二列為菌落反面、第三列為 400 顯微鏡照片，第一行為枝狀枝孢形態(tài)特征，第二行為極細(xì)枝孢形態(tài)特征。易脆毛霉 Mucor fragilis，毛霉亞門，毛霉目，毛霉科，毛霉屬中的一個(gè)種，在 25℃條件下 PDA 培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)迅速，覆蓋整個(gè)培養(yǎng)基，但在 PDA 培養(yǎng)基上不產(chǎn)孢(圖 2-4)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Diversity Analysis of Endophytic Fungi in Mentha Using Illumina MiSeq High-throughput Sequencing Technology[J]. Zebin CHEN,Tiyuan XIA,Dingkang WANG,Guoxing WU,Jiani LIU,Yongfu ZHANG,Zhen REN,Song JIN,Shengjing PENG,Yanfen NIU.  Medicinal Plant. 2016(Z1)
[2]高通量測(cè)序法對(duì)清香大曲真菌群落結(jié)構(gòu)的分析[J]. 喬曉梅,趙景龍,杜小威,張秀紅.  釀酒科技. 2015(04)
[3]高通量測(cè)序技術(shù)及其在檢驗(yàn)檢疫中的應(yīng)用展望[J]. 潘嵩,陳巖,朱水芳.  植物檢疫. 2014(05)
[4]基于多基因序列分析對(duì)尖孢鐮孢菌古巴專化型(香蕉枯萎病菌)生理小種的鑒定[J]. 曾莉莎,呂順,劉文清,趙志慧,王芳,周建坤,李洪波,陳石,杜彩嫻.  菌物學(xué)報(bào). 2014(04)
[5]一種提取真菌基因組DNA的新方法[J]. 蔡文嬌,徐大彬,藍(lán)霞,謝紅輝,韋繼光.  農(nóng)業(yè)研究與應(yīng)用. 2014(03)
[6]甘草根腐病病原菌鑒定[J]. 曹雪梅,李生兵,張惠玲,胡小平.  植物病理學(xué)報(bào). 2014(02)
[7]利用高通量測(cè)序分析云南豆豉中細(xì)菌群落多樣性[J]. 李曉然,李潔,劉曉峰,馮陽(yáng),柳陳堅(jiān).  食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2014(02)
[8]鐮刀菌屬真菌毒素的研究進(jìn)展[J]. 張衛(wèi)娜,賈諫,陸曉宇,陳中健,孔謙,陳莊.  廣東農(nóng)業(yè)科學(xué). 2013(15)
[9]DNA條形碼技術(shù)及其在真菌研究中的應(yīng)用[J]. 林惠嬌,蔣湘,王新國(guó),王衛(wèi)芳.  植物檢疫. 2013(02)
[10]一種改良的植物DNA提取方法[J]. 李金璐,王碩,于婧,王玲,周世良.  植物學(xué)報(bào). 2013(01)

博士論文
[1]土壤病原真菌的檢測(cè)及土壤中真菌群落多樣性的研究[D]. 趙爽.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[2]種帶真菌對(duì)多年生黑麥草（Lolium Perenne L.）種子質(zhì)量的影響[D]. 張穎.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005
[3]禾谷鐮刀菌（Fusarium graminearum）致病力鑒定、毒素檢測(cè)及其分子生物學(xué)研究[D]. 武愛波.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005

碩士論文
[1]兩種地衣中內(nèi)生真菌物種多樣性的比較研究[D]. 鄒運(yùn).山東師范大學(xué) 2015



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