目的對廣藿香青枯病菌低致病力突變株進行遺傳穩(wěn)定性評價。方法以廣藿香青枯菌菌株PRS-84（對照）及通過Tn5轉(zhuǎn)座子插入獲得的低致病力突變株PRS-84-4-7、PRS-84-4-49為供試菌株,分別繼代培養(yǎng)至100代;以Tn5轉(zhuǎn)座子上的Kanr基因設計引物,對繼代突變株進行PCR驗證,并根據(jù)Tn5轉(zhuǎn)座子序列設計引物,通過反向PCR檢測轉(zhuǎn)座子插入位點,以考察突變株基因組中Tn5轉(zhuǎn)座子的遺傳穩(wěn)定性;通過觀察菌體形態(tài),并測定生長曲線、運動性、生物膜形成能力及致病性,考察突變株繼代前后表型的變化。結(jié)果 Tn5轉(zhuǎn)座子在繼代100代的低致病力突變株基因組中仍穩(wěn)定存在,且插入位點不變;繼代對低致病力突變株的菌體形態(tài)、生長速率、運動性、生物膜形成能力及致病力沒有明顯的影響。結(jié)論通過Tn5轉(zhuǎn)座子插入突變獲得的低致病力突變株具有良好的遺傳穩(wěn)定性,為研發(fā)防治廣藿香青枯病的生防菌株奠定基礎。 

【文章來源】：中藥新藥與臨床藥理. 2020,31(08)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

廣藿香青枯病菌低致病力突變株基因組中Tn5轉(zhuǎn)座子的遺傳穩(wěn)定性檢測

通過革蘭氏染色法染色后，觀察各供試菌株的菌體形態(tài)。由圖2可見突變株PRS-84-4-7、PRS-84-4-49與野生菌株PRS-84菌體均呈短桿狀，多兩個連在一起或單個存在，突變株和野生菌株的菌體形態(tài)相似，原代及繼代100代菌株的菌體形態(tài)無明顯變化。3.3 生長曲線測定

生物膜是微生物有組織生長的聚集體。以生物膜形式存在的細菌不同于浮游細菌，它們對惡劣環(huán)境及宿主免疫防御機制有很強的抗性。病原菌生物膜形成是重要的致病因子之一[9]。本實驗采用結(jié)晶紫染色法，分別測定各供試菌株在孔壁形成生物膜的能力。實驗結(jié)果見圖5。與野生菌株PRS-84相比，突變株PRS-84-4-7生物膜形成能力下降，突變株PRS-84-4-49生物膜形成能力無明顯變化；各供試菌株繼代后與原代相比，生物膜形成能力均稍減弱。圖5 供試菌株的生物膜形成能力測定

【參考文獻】：
期刊論文
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[2]廣藿香青枯病菌的分離培養(yǎng)及致病性測定[J]. 劉丹,賀紅,黃海波,謝建輝,柴婷婷.  中草藥. 2011(08)
[3]青枯雷爾氏菌Tn5轉(zhuǎn)座子無致病力突變株構(gòu)建及其生物學特性[J]. 程本亮,車建美,劉波.  農(nóng)業(yè)生物技術學報. 2011(01)
[4]Tn5轉(zhuǎn)座突變技術在革蘭氏陰性細菌分子遺傳研究中的應用[J]. 年洪娟,陳麗梅,李昆志.  中國生物工程雜志. 2009(12)
[5]利用拮抗微生物防治中藥材土傳病害研究進展[J]. 趙阿娜,丁萬隆.  中國中藥雜志. 2005(07)



本文編號：3116751