RPW8.2是從擬南芥生態(tài)型MS-0中克隆得到的一個(gè)對(duì)白粉病菌具有廣譜抗性的基因,編碼一個(gè)由跨膜錨定結(jié)構(gòu)域和CC結(jié)構(gòu)域構(gòu)成的抗性蛋白。RPW8.2的表達(dá)受白粉菌侵染誘導(dǎo),其蛋白特異錨定于吸器外質(zhì)膜（extra-haustorial membrane,EHM）上,運(yùn)輸?shù)紼HM的過程依賴于細(xì)胞骨架和自身兩個(gè)富含精氨酸和賴氨酸的保守元件（R/K-R/K-x-R/K）。RPW8.2所介導(dǎo)的抗性反應(yīng)包括SA的積累、PR基因的升高、H2O2的積累、胼胝質(zhì)的沉積和HR反應(yīng),但其產(chǎn)生抗性的機(jī)制依然沒有明確。通過對(duì)RPW8.2氨基酸序列的預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)一個(gè)核定位信號(hào)。為了驗(yàn)證預(yù)測(cè)的核定位信號(hào),首先使用經(jīng)典的核定位信號(hào)NLS_SV40融合單個(gè)紅色熒光報(bào)告基因在煙草中瞬時(shí)表達(dá)檢驗(yàn)該系統(tǒng)的可行性。發(fā)現(xiàn)融合蛋白R(shí)FP-NLS_SV40由于分子量太小可以通過自由擴(kuò)散的方式穿梭于核質(zhì)之間,所以其亞細(xì)胞定位結(jié)果與RFP一樣在細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)中均有熒光。為了讓報(bào)告基因系統(tǒng)表達(dá)的融合蛋白分子量高于核孔復(fù)合物被動(dòng)運(yùn)輸所需的大小,我們采用含有兩個(gè)串聯(lián)的熒光報(bào)告基因的載體來驗(yàn)證核質(zhì)穿梭相關(guān)信號(hào)。... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

已知的PRR和其配體[3]

病原菌的入侵[36, 37]。這個(gè)例子也說明，當(dāng)病原菌進(jìn)化出效后，植物也會(huì)進(jìn)化出相應(yīng)的 R 蛋白去識(shí)別效應(yīng)因子從而誘子誘導(dǎo)的抗病反應(yīng)（ETI）原菌在長(zhǎng)久的攻防壓力之下協(xié)同進(jìn)化，病原菌擁有越來越物的免疫反應(yīng)，而植物也進(jìn)化出更多的 R 基因來特異地識(shí)南芥中發(fā)現(xiàn)了約有 200 個(gè)編碼含有核苷酸結(jié)合位點(diǎn)（nucl基因，其中有 149 個(gè)編碼 NLR（nucleotide-binding/leucine根據(jù) N 末端的不同可以將 R 蛋白分為兩大類，一類的 Nin-1 受體同源的結(jié)構(gòu)域，稱為 TNLs。另一類的 N 端編碼l）結(jié)構(gòu)域，稱為 CNLs[38]。

3 結(jié)果與分析3.1 熒光報(bào)告基因系統(tǒng)的構(gòu)建及核質(zhì)穿梭驗(yàn)證由于熒光蛋白在亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)中不具備選著性定位的優(yōu)點(diǎn)，將其與目標(biāo)蛋白融合表達(dá)后，通過熒光顯微鏡系統(tǒng)可以非常直觀的觀察到目標(biāo)蛋白的亞細(xì)胞定位。例如，Wang 等將 eYFP 與擬南芥廣譜抗病蛋白 RPW8.2 融合，觀察到 RPW8.2-eYFP 由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)合成并運(yùn)輸至吸器外質(zhì)膜的過程[108]。另外，構(gòu)建融合熒光報(bào)告基因的載體，在本生煙（Nicotiana benthamiana）中瞬時(shí)表達(dá)可以非�？焖儆行У拇_定目標(biāo)蛋白的亞細(xì)胞定位。所以我們將采用該系統(tǒng)來快速的驗(yàn)證 RPW8.2 中預(yù)測(cè)的核質(zhì)穿梭相關(guān)信號(hào)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]植物葉綠素降解機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 丁躍,吳剛,郭長(zhǎng)奎.  生物技術(shù)通報(bào). 2016(11)



本文編號(hào)：3103724