發(fā)布時(shí)間：2021-03-10 13:24

　　綠僵菌在害蟲(chóng)生物防治中起重要作用,也已經(jīng)廣泛應(yīng)用于蝗蟲(chóng)等的防治。羅伯茨綠僵菌（Metarhizium robertsii,下稱(chēng)綠僵菌）作為昆蟲(chóng)病原真菌的模式生物,在昆蟲(chóng)病原真菌的代謝調(diào)控,致病機(jī)理,遺傳調(diào)節(jié)機(jī)制和生物技術(shù)防治研究中起重大作用。多年來(lái),國(guó)內(nèi)外學(xué)者致力羅伯茨綠僵菌致病和抗逆的分子機(jī)理研究,取得了豐碩的結(jié)果;但是作為生防真菌,羅伯茨綠僵菌仍有很多的弱點(diǎn),如:殺蟲(chóng)速度較慢,易被環(huán)境影響等,因此,限制了綠僵菌在生產(chǎn)上的大規(guī)模應(yīng)用。轉(zhuǎn)錄組測(cè)序可以得到某一種特定組織或者細(xì)胞的將近全部轉(zhuǎn)錄本和基因序列通過(guò)利用二代測(cè)序平臺(tái),而今,也已廣泛應(yīng)用于真核生物,包括綠僵菌,但羅伯茨綠僵菌的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究?jī)?nèi)容較少;且通過(guò)利用RNA-Seq技術(shù),可以解決特定的生物學(xué)問(wèn)題,包括可變剪切分析,優(yōu)化基因結(jié)構(gòu),新轉(zhuǎn)錄本鑒定以及發(fā)掘新基因等。為此,本研究以羅伯茨綠僵菌為研究對(duì)象,首先在4個(gè)不同條件下（包括生長(zhǎng)發(fā)育、逆境脅迫、侵染定殖以及退化）,培養(yǎng)綠僵菌,提取其總RNA,并完成轉(zhuǎn)錄組測(cè)序;其次,就測(cè)序所得轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)進(jìn)行生物信息學(xué)分析,對(duì)預(yù)測(cè)的新轉(zhuǎn)錄本,完成功能注釋;最后,針對(duì)從注釋的新轉(zhuǎn)錄本中篩選到小泛素相關(guān)修... 

【文章來(lái)源】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：61 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

綠僵菌主要侵染階段

2) 合適溫片段，一次3) 對(duì)此 cD接頭，在此4) 使用 Ag的 cDNA 文度條件下，次為模板，得DNA 進(jìn)行純此之后選擇gilent 2100文庫(kù)檢驗(yàn)質(zhì)在儀器 The得到一條單鏈純化，粘性擇不同長(zhǎng)短的Bioanalyze質(zhì)量，最后利ermomixer鏈的cDNA性末端的修復(fù)的片段，并er 和儀器 A利用 Illumi里添加適量A，利用堿基復(fù)以及在其并完成的 PCABI StepOnna HiSeqTM量打斷試劑配對(duì)原理，其 3’末端添加CR 擴(kuò)增。nePlus RealM2000 完成劑，用以得到合成為雙鏈加 polyA 尾l-Time PCR成測(cè)序。到 m鏈c尾巴R 對(duì)

圖 2-2 信息分析流程Figure 2-2 Information analysis process2.2.3.2新轉(zhuǎn)錄本預(yù)測(cè)及分析為了發(fā)現(xiàn)所供樣品里的新轉(zhuǎn)錄本信息，我們便比對(duì)所提供樣品里測(cè)得的轉(zhuǎn)錄本和參考基因組中已有的轉(zhuǎn)錄本。然而，預(yù)測(cè)得到的新轉(zhuǎn)錄本都滿足以下幾個(gè)條件：不僅要與現(xiàn)存的已注釋基因之間有大于 200bp 的間距；而且其序列長(zhǎng)度≥ 180bp 以及序列測(cè)定深度≥2。如圖 2-3 為新轉(zhuǎn)錄本預(yù)測(cè)方法。

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3074733