本研究的目的是確定糖醇（甘露醇或山梨醇）對拮抗酵母菌Debaryomyces hansenii的抗逆性和生物防治效力的影響。其中包含:測定拮抗酵母菌D.hansenii在不同逆境（氧化、高溫,鹽）條件下的存活率;利用甘露醇或山梨醇預處理酵母細胞,隨后暴露于高溫,氧化（H₂O₂）脅迫下的細胞存活率;甘露醇或山梨醇對酵母細胞D.hansenii中抗氧化酶的誘導作用,其中包括過氧化氫酶（CAT）,超氧化物歧化酶（SOD）;定量RT-q PCR測定甘露醇或山梨醇預處理對D.hansenii抗氧化基因表達量的影響,以及在蘋果傷口和體外p H 4.0的酵母蛋白胨葡萄糖培養(yǎng)基（YPD）中酵母細胞的種群動態(tài);D.hansenii預處理細胞對蘋果的青霉病和灰霉病的生防效果。研究結果表明,與沒有預處理的對照組酵母細胞相比,0.1 M甘露醇或0.1 M山梨醇預處理增強了D.hansenii對隨后的氧化和高溫脅迫的耐受性。當酵母細胞暴露于隨后的氧化逆境（30 m M H₂O₂）或高溫逆境（40.5^oC... 

【文章來源】：貴州大學貴州省 211工程院校

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【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1.1 拮抗酵母菌的生防研究概述
        1.1.1 拮抗酵母菌的簡介
        1.1.2 拮抗酵母菌的生物防治研究
    1.2 水果采后的主要病害
        1.2.1 青霉病概述
        1.2.2 灰霉病概述
    1.3 拮抗酵母菌的逆境耐受性
        1.3.1 氧化逆境
        1.3.2 高溫逆境
        1.3.3 鹽逆境
    1.4 甘露醇與山梨醇的概述
        1.4.1 甘露醇概述
        1.4.2 山梨醇概述
    1.5 本實驗研究的目的與意義
        1.5.1 實驗研究目的
        1.5.2 實驗研究意義
第二章 甘露醇、山梨醇提高拮抗酵母菌耐受性的研究
    2.1 實驗材料
        2.1.1 拮抗酵母菌
        2.1.2 主要試劑與試劑盒
            2.1.2.1 常用生化試劑
            2.1.2.2 主要試劑盒
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 培養(yǎng)基及試劑配制
            2.1.4.1 馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）
            2.1.4.2 酵母蛋白胨葡萄糖培養(yǎng)基（YPD）
            2.1.4.3 磷酸鉀緩沖液
            2.1.4.4 2',7'-二氯氫化熒光素乙二脂熒光染料液配制
            2.1.4.5 蛋白定量試劑及配制
            2.1.4.6 過氧化氫酶（CAT）試劑組成與配制
            2.1.4.7 超氧化物歧化酶（SOD）試劑組成與配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 拮抗酵母菌在不同逆境下的存活率測定
            2.2.1.1 高溫逆境
            2.2.1.2 氧化逆境
            2.2.1.3 鹽逆境處理
        2.2.2 甘露醇、山梨醇對拮抗酵母菌預處理
        2.2.3 甘露醇、山梨醇預處理對拮抗酵母菌在逆境下的存活率影響
            2.2.3.1 致死氧化條件下存活率測定
            2.2.3.2 致死高溫條件下存活率測定
        2.2.4 甘露醇、山梨醇預處理對拮抗酵母細胞內活性氧（ROS）積累的影響
        2.2.5 甘露醇、山梨醇對拮抗酵母菌生理生化指標變化的影響
            2.2.5.1 粗酶液提取
            2.2.5.2 考馬斯亮藍法測定蛋白含量
            2.2.5.3 拮抗酵母細胞內CAT酶活性測定
            2.2.5.4 拮抗酵母細胞內SOD酶活性測定
        2.2.6 甘露醇、山梨醇對拮抗酵母菌抗性基因表達量的影響
            2.2.6.1 拮抗酵母菌總RNA的提取
            2.2.6.2 mRNA反轉錄為cDNA
            2.2.6.3 RT-q PCR分析甘露醇、山梨醇對拮抗酵母菌抗性基因表達量的影響
        2.2.7 甘露醇、山梨醇預處理對拮抗酵母菌種群數(shù)量增長速度的影響
            2.2.7.1 拮抗酵母菌在pH=4.0的YPD培養(yǎng)基中的生長速度
            2.2.7.2 拮抗酵母在蘋果傷口上的繁殖速度
        2.2.8 數(shù)據(jù)分析
    2.3 結果分析
        2.3.1 不同逆境對拮抗酵母菌的存活率影響
        2.3.2 甘露醇、山梨醇預處理對拮抗酵母菌逆境條件的存活率影響
        2.3.3 酵母細胞內ROS的積累
        2.3.4 甘露醇、山梨醇對拮抗酵母菌生理生化指標變化的影響
        2.3.5 甘露醇、山梨醇對拮抗酵母菌抗性基因表達量的影響
        2.3.6 甘露醇預處理對拮抗酵母菌種群數(shù)量增長速度的影響
        2.3.7 山梨醇預處理對拮抗酵母菌種群數(shù)量增長速度的影響
    2.4 討論
第三章 甘露醇、山梨醇提高拮抗酵母菌生防效力的研究
    3.1 實驗材料
        3.1.1 水果
        3.1.2 拮抗酵母菌的活化
        3.1.3 病原菌的活化
    3.2 實驗方法
        3.2.1 拮抗酵母菌的預處理
        3.2.2 甘露醇、山梨醇預處理對青霉病的生物防治
        3.2.3 甘露醇、山梨醇預處理對灰霉病的生物防治
    3.3 數(shù)據(jù)分析
    3.4 實驗結果與分析
        3.4.1 拮抗酵母菌對青霉病的生防效果
        3.4.2 拮抗酵母菌對灰霉病的生防效果
    3.5 討論
第四章 結論與展望
    4.1 結論
    4.2 展望
參考文獻
致謝
附錄


【參考文獻】：
期刊論文
[1]蘋果腐敗霉菌的拮抗酵母菌篩選鑒定及拮抗機理初探[J]. 劉程惠,吳祎男,胡文忠,王艷穎,田密霞.  食品工業(yè)科技. 2018(12)
[2]控制蔬菜污染的措施[J]. 繆曉玲.  閩東農業(yè)科技. 2016(03)
[3]葡萄常見病害及防治方法[J]. 高紅娟,崔映青.  中國園藝文摘. 2012(09)
[4]拮抗酵母菌對果蔬病害防治的研究進展[J]. 宋金宇,劉程惠,胡文忠,何煜波,富麗萍.  保鮮與加工. 2012(05)

碩士論文
[1]畢赤酵母Pichia anomala SRF對蘋果采后青霉病的生防機制研究[D]. 李慧玲.廣東海洋大學 2014



本文編號：3047878