蘋(píng)果輪紋病是蘋(píng)果生產(chǎn)中最重要的病害之一,可危害蘋(píng)果的枝干和果實(shí),給蘋(píng)果產(chǎn)業(yè)造成巨大損失,據(jù)統(tǒng)計(jì),中國(guó)蘋(píng)果產(chǎn)區(qū)每年因蘋(píng)果輪紋病造成的損失高達(dá)50億元。WRKY轉(zhuǎn)錄因子參與植物的各種生理過(guò)程,其中一個(gè)主要功能與植物的抗病有關(guān),在植物的抗病反應(yīng)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中起著關(guān)鍵作用。而到目前為止,雖然WRKY轉(zhuǎn)錄因子在擬南芥、煙草等模式植物中已有較深入研究,但對(duì)于調(diào)控蘋(píng)果對(duì)輪紋病抗性的蘋(píng)果基因組WRKY轉(zhuǎn)錄因子的篩選與鑒定,國(guó)內(nèi)外仍研究報(bào)道較少,因此,本研究以轉(zhuǎn)基因蘋(píng)果愈傷組織和擬南芥為材料,并利用原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化、接菌等技術(shù),鑒定MdWRKY40基因的生物學(xué)功能,來(lái)闡明MdWRKY40基因在蘋(píng)果抵御輪紋病菌侵染過(guò)程中的作用,為進(jìn)一步揭示蘋(píng)果的抗病機(jī)制以及培育抗病新品種提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:1.以‘紅富士’蘋(píng)果果實(shí)為試材,克隆得到MdWRKY40基因的全長(zhǎng)CDS序列,系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析表明,蘋(píng)果MdWRKY40與白梨PbWRKY40序列相似性最高,親緣關(guān)系最近,蛋白序列比對(duì)分析發(fā)現(xiàn),MdWRKY40蛋白與擬南芥AtWRKY4、AtWRKY40蛋白都包含5個(gè)β折疊,都含有一個(gè)C₂H

【文章來(lái)源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

MdWRKY40表達(dá)載體構(gòu)建（A）MdWRKY40編碼區(qū)全長(zhǎng)的PCR擴(kuò)增；（B）pCB302-35S-MdWRKY40-2HA表達(dá)載體酶切驗(yàn)證

圖 7 愈傷組織（A）輪紋病菌侵染蘋(píng)果愈傷組織表型；（Fig. 7 Callus Inocula(A) The phenotype of apple callus after infected by B. dothiB. d3.6.3 超表達(dá) MdWRKY40 對(duì)接菌后蘋(píng)果愈傷病程相關(guān)蛋白 PRs 是植物先天免疫系統(tǒng)面發(fā)揮重要作用，其中 PR1、PR2 和 PR5 主參與 JA 抗病信號(hào)通路。為了進(jìn)一步研究 M用，通過(guò) qRT-PCR 方法檢測(cè)接種蘋(píng)果輪紋病‘王林’愈傷組織中病程相關(guān)蛋白基因的表相關(guān)蛋白基因 MdPR2、MdPR5、MdPR8 的8）。圖 7 的結(jié)果顯示，接種蘋(píng)果輪紋病菌

Fig. 10 Gene silencing callu(A) The phenotype of apple callus after infected by B. dothidedothidea; (C) MdPR2 gene expression induced by B. dothidsamples 0-0.5 cm, 0.5-1 cm, and 1-1.5 cm from lesions,thdothidea; (E) MdPR5 gene expression induced by B. dot3.8 異源表達(dá) MdWRKY40 對(duì)擬南芥輪3.8.1 轉(zhuǎn)基因擬南芥的鑒定將構(gòu)建的 MdWRKY40 過(guò)表達(dá)載體轉(zhuǎn)化利用 35S 啟動(dòng)子引物和下游克隆引物進(jìn)行然后利用半定量和定量 PCR 進(jìn)一步驗(yàn)證陽(yáng)基因在轉(zhuǎn)基因株系 7#、12#中的表達(dá)量顯著果顯示，與野生型擬南芥相比，轉(zhuǎn)基因擬南585 倍和 545 倍，與半定量結(jié)果一致，證明達(dá)（圖 11C）。A7#12#ColCK 質(zhì)粒/plasmi1500 bp

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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