小麥條銹病在小麥生產(chǎn)中引起嚴(yán)重病害,長(zhǎng)期以來(lái)一直威脅著中國(guó)小麥的安全生產(chǎn)。條銹菌是一種活體型寄生菌,但是由于缺乏有效的遺傳轉(zhuǎn)化方法,對(duì)條銹病的致病基因功能的研究相對(duì)較為緩慢,對(duì)病害的控制較為困難。然而,病害機(jī)制和效應(yīng)蛋白毒性致病機(jī)制在病害的預(yù)防和控制中起重要作用。本研究目的是研究條銹菌效應(yīng)基因Pst03724的功能,為此基因的功能研究供給了理論基礎(chǔ)。通過(guò)RT-PCR以及PCR的基因克隆獲得Pst03724全長(zhǎng)cDNA和基因組DNA,通過(guò)生物信息學(xué)的方法對(duì)其序列特征進(jìn)行了分析。利用瞬時(shí)表達(dá)、實(shí)時(shí)定量RT-PCR（qRT-PCR）、亞細(xì)胞定位和病毒誘導(dǎo)的基因沉默（HIGS）鑒定該基因功能。序列結(jié)果表明,Pst03724全長(zhǎng)為長(zhǎng)387bp。通過(guò)網(wǎng)站預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)該效應(yīng)蛋白的信號(hào)肽位于其N末端1至36個(gè)氨基酸,全長(zhǎng)編碼129個(gè)氨基酸并且不包含跨膜結(jié)構(gòu)和核定位信號(hào)。利用PVX介導(dǎo)的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化可以顯著的抑制由Pst322引起的壞死。利用酵母分泌系統(tǒng)的分析表明Pst03724的信號(hào)肽具有分泌功能并且是典型的分泌蛋白。qRT-PCR結(jié)果顯示,在條銹菌感染過(guò)程中,Pst03724表達(dá)上調(diào),在18h和24h表達(dá)... 

【文章來(lái)源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：52 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 小麥條銹病與條銹菌的簡(jiǎn)介
        1.1.1 小麥條銹病的危害性
        1.1.2 條銹菌生活史
    1.2 病菌效應(yīng)蛋白的研究進(jìn)展
        1.2.1 植物病原菌效應(yīng)蛋白的定義與功能
        1.2.2 小麥銹菌效應(yīng)蛋白的研究?jī)H處于起步階段
    1.3 RNAi技術(shù)應(yīng)用的初步探究
    1.4 試驗(yàn)?zāi)康囊饬x和研究?jī)?nèi)容
        1.4.1 試驗(yàn)?zāi)康囊饬x
        1.4.2 研究?jī)?nèi)容
        1.4.3 技術(shù)路線
第二章 小麥條銹菌效應(yīng)蛋白Pst03724的功能分析
    2.1 試驗(yàn)所用材料
        2.1.1 所用菌種及植物種類
        2.1.2 試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)使用的儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)所用方法
        2.2.1 接種對(duì)條銹菌擴(kuò)繁
        2.2.2 RNA樣品采集
        2.2.3 小麥條銹菌DNA的提取
        2.2.4 總RNA的提取
        2.2.5 反轉(zhuǎn)錄的步驟
        2.2.6 小麥條銹菌Pst03724的擴(kuò)增及測(cè)序
        2.2.7 農(nóng)桿菌在煙草葉片上瞬時(shí)表達(dá)
        2.2.8 信號(hào)肽分泌功能的驗(yàn)證
        2.2.9 轉(zhuǎn)錄水平分析
        2.2.10 小麥原生質(zhì)的定位試驗(yàn)
        2.2.11 小麥的HIGS實(shí)驗(yàn)（基因沉默）
    2.3 結(jié)果分析
        2.3.1 pst322產(chǎn)生的葉片壞死被Pst03724抑制
        2.3.2 信號(hào)肽分泌功能分析
        2.3.3 轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平分析
        2.3.4 原生質(zhì)定位結(jié)果分析
        2.3.5 分析HIGS沉默目的基因的實(shí)驗(yàn)
    2.4 分析與討論
        2.4.1 Pst03724可能是胞內(nèi)效應(yīng)蛋白
        2.4.2 Pst03724的毒性功能的分析
第三章 利用HIGS技術(shù)創(chuàng)制抗條銹病新材料
    3.1 材料與方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 基因槍法進(jìn)行小麥遺傳轉(zhuǎn)化
    3.2 結(jié)果分析
        3.2.1 目標(biāo)基因PsCNB1的PCR檢測(cè)結(jié)果
        3.2.2 PsCNB的T0代抗病性鑒定結(jié)果
    3.3 結(jié)論與討論
第四章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]小麥條銹菌PsNCS1基因的克隆及轉(zhuǎn)錄表達(dá)特征[J]. 郭軍,張洪,丁可,代西維,陳玥穎,段迎輝,黃麗麗,康振生.  微生物學(xué)報(bào). 2010(07)
[2]小麥與條銹菌親和互作的差減文庫(kù)構(gòu)建及初步分析[J]. 喻修道,屈志鵬,郭軍,于秀梅,黃雪玲,韓青梅,黃麗麗,康振生.  中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2008(05)

博士論文
[1]小麥條銹菌致病相關(guān)基因鑒定及其功能研究[D]. 成玉林.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2015
[2]條銹菌與小麥互作中效應(yīng)蛋白及誘導(dǎo)寄主細(xì)胞壞死基因的鑒定與功能分析[D]. 湯春蕾.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2013



本文編號(hào)：2958873