稻瘟菌分泌的小分子蛋白MoSM1是一類Cerato-platanin蛋白。目前,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)MoSM1蛋白作為稻瘟菌的毒力因子也可以作為植物免疫反應(yīng)的激發(fā)子。但是,關(guān)于寄主植物識別MoSM1,并且如何激活下游抗病信號通路的機制研究還沒有報道。為了鑒定出水稻中能夠識別并結(jié)合MoSM1蛋白的受體蛋白,我們利用酵母雙雜交和蛋白質(zhì)免疫沉淀結(jié)合液相串聯(lián)質(zhì)譜實驗篩選與MoSM1的寄主受體蛋白。在酵母雙雜交實驗中,將含有pGBKT7-MoSM1的Y2HGold菌株與含有水稻的cDNA文庫的酵母Y187菌株進行mating。最后得到30個陽性克隆,并根據(jù)這些基因所編碼的蛋白的功能將范圍縮小到8個。但接下來的驗證互作實驗中,發(fā)現(xiàn)它們均不能檢測出互作信號,因此,酵母雙雜交實驗未能鑒定出與MoSM1互作的水稻蛋白。利用IP-MS技術(shù)篩選鑒定MoSM1的水稻受體蛋白。實驗中設(shè)置了三個實驗組及一個陰性對照普通型水稻XS11。提取水稻葉片總蛋白進行IP實驗。將所得到的蛋白進行質(zhì)譜分析。質(zhì)譜分析鑒定到膠條中含有220個蛋白,對這些蛋白進行GO功能分析,并依據(jù)蛋白功能、結(jié)構(gòu)域、亞細胞定位等指標(biāo)來初步篩選出約20個候選互作... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．１酵母四缺培養(yǎng)基上篩選與ＳＭ１互作的水稻候選蛋白??

?一－一＝一．．??ａｉｉｔｉ－Ｈｉｓ??圖２．８體外檢測ＭｏＳＭｌ與Ｙ４互作??Ｆｉｇｕｒｅ?２．８?Ｉｎ?ｖｉｔｒｏ?ｂｉｎｄｉｎｇ?ａｓｓａｙ?ｗｉｔｈ?ＧＳＴ－Ｙ４ｏｒ?ＧＳＴ－ｅｃｔｏＹ４?ｐｕｒｉｆｉｅｄ?ｆｒｏｍ?Ｒｏｓｅｔｔａ，?ｐｕｌｌ？??ｄｏｗｎ?ａｓｓａｙ?ｆｏｒ?ｉｍｍｕｎｅ－ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ?（ＩＰ）?ｗａｓ?ｄｏｎｅ?ｗｉｔｈ?ＧＳＴ－ｂｉｎｄ?ｂｅａｄｓ；?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?（ＷＢ）??ｗｅｒｅ?ｐｒｏｂｅｄ?ｗｉｔｈ?ａｎｔｉｂｏｄｙ?ａｇａｉｎｓｔ?ＧＳＴ（ａ－ＧＳＴ）?ｏｒ?Ｈｉｓ（ａ－Ｈｉｓ）．??３１??

探針＃?？?＃??圖３．１探針標(biāo)記效率檢測??Ｆｉｇｕｒｅ?３．１?Ｑｕａｎｔｉｆｙ?ｔｈｅ?ｌａｂｅｌｉｎｇ?ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ?ｏｆ?ＤＩＧ－ｌａｂｅｌｅｄ?ｐｒｏｂｅ．?Ｔｈｅ?ｕｐｐｅｒ?ｌｉｎｅ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ?ｓｅｒｉｅｓ??ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｌａｂｅｌｅｄ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ＤＮＡ；?ｔｈｅ?ｌｏｗｅｒ?ｌｉｎｅ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ?ｓｅｒｉｅｓ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｏｒ！?ｏｆ?ｌａｂｅｌｅｄ??ｐｒｏｂｅ．??ＸＳ１１?ＳＭ１６Ｉ１Ｓ－７??［（０？?ＨｎｄＲ?Ｅｃ〇ｎ?Ｈｎｌｌ?Ｍ??８５７６??？＊?＾?７４２７??？?６１０６??＾?４８９９??？－?３６３９??？?２７９９??—？?Ａ??圖３．２?Ｓｏｕｔｈｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測轉(zhuǎn)基因株系的基因拷貝數(shù)??Ｆｉｇｕｒｅ?３．２?Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ?ｔｈｅ?ｇｅｎｅ?ｃｏｐｉｅｓ?ｏｆ?ＭｏＳＭｌＧ?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ?ｌｉｎｅｓ?ｂｙ?Ｓｏｕｔｈｅｒｎ??ｂｌｏｔ．?ＸＳ１１?ｉｓ?ｔｈｅ?ｎｏｎ－ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ?ｒｉｃｅ?ａｓ?ａ?ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ，?ａｎｄ?ＳＭＩＧ＃?１８／７?ｉｓ?ａ?ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ??ｌｉｎｅ?ｏｆ?�。�?ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ；?ｇｅｎｏｍｉｃ?ＤＮＡ?ｗｅｒｅ?ｄｉｇｅｓｔｅｄ?ｂｙ?ｔｗｏ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?Ａ／?ａｎｄ?／／／＞？＾／／／／


本文編號：2956976