柑桔黃化脈明病是由柑桔黃化脈明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)引起的一種新發(fā)柑桔病害。1988年,CYVCV首次在巴基斯坦的檸檬(Citrus limon)和酸橙(C.aurantium)上被發(fā)現。自2009年在中國首次被發(fā)現以來,該病傳播迅速,目前已在中國各柑桔主產省區(qū)均有分布。柑桔黃化脈明病能夠危害大多數的柑桔類型,其中以檸檬、酸橙最為敏感。檸檬敏感類型發(fā)病后葉脈黃化、透明、葉片脫落、產量降低,甚至絕收,對我國檸檬產業(yè)造成嚴重的經濟損失。目前已知CYVCV除可以通過感病苗木和接穗在柑桔間進行傳播外,還可以通過豆蚜(Aphis craccivora)和繡線菊蚜(A.spiraecola)在菜豆之間,以及檸檬到菜豆之間進行傳播。但目前尚不清楚CYVCV在柑桔間的傳播媒介,也不清楚是否還存在其它的傳播途徑,因此給柑桔黃化脈明病的防控造成了困難。為此,本研究對柑桔黃化脈明病的傳播途徑開展了系統(tǒng)研究。本研究在明確柑桔園中常見節(jié)肢動物種類攜帶CYVCV的基礎上,檢測了繡線菊蚜、褐色桔蚜(Toxoptera citricidus)、柑桔紅蜘蛛(Panonychus citri)和柑桔粉虱(Dialeurodes citri)在柑桔間的傳毒能力。同時測定了CYVCV通過污染刀具進行傳播的可能性,也對重慶和四川周邊CYVCV高發(fā)柑桔果園中的龍葵進行田間檢測,以期明確CYVCV在柑桔間的傳播途徑,從而為CYVCV的防治和流行學研究奠定基礎。主要結果如下:1.運用實時熒光定量PCR法在田間常見的繡線菊蚜、褐色桔蚜、柑桔紅蜘蛛和柑桔粉虱中檢測出了CYVCV。此外,建立了CYVCV的微滴數字PCR檢測體系。該方法特異性良好,靈敏度為實時熒光定量PCR的100倍,今后可用于CYVCV的早期檢測及單頭節(jié)肢動物的帶毒量檢測。2.繡線菊蚜傳毒實驗。溫室條件下,在毒源甜橙植株上飼養(yǎng)繡線菊蚜無翅成蚜48 h,將其放置在受毒無毒植株上取食24 h,每株分別放置50頭(3個處理,每個處理15株)。在受毒植株上取食48 h,每株分別放置50頭(3個處理,每個處理30株)。取食時間24 h,取食后3個月和6個月,DTBIA和RT-PCR檢測結果顯示,4.4%的受毒植株感染了CYVCV。取食時間48 h,取食后3個月后,DTBIA和RT-PCR檢測結果顯示,其平均檢出率分別為15.5%和17.8%。取食后6個月后,DTBIA和RT-PCR檢測結果一致,其平均檢出率均為23.3%。本研究首次證實CYVCV可以通過繡線菊蚜在柑桔間進行傳播。3.褐色桔蚜傳毒實驗。溫室條件下,在毒源甜橙植株上飼養(yǎng)褐色桔蚜無翅成蚜48 h,然后將飼毒后的桔蚜放置在受毒植株甜橙實生苗上取食24 h,每株分別放置50頭(29株),100頭(29株),150頭(29株)。在取食后3個月、6個月和12個月,進行DTBIA和RT-PCR檢測,均未能在受毒植株中檢測到CYVCV。4.柑桔紅蜘蛛傳毒實驗。溫室條件下,在毒源酸橙植株上飼養(yǎng)柑桔紅蜘蛛成螨48 h,將飼毒后的柑桔紅蜘蛛成螨放置在受毒植株酸橙實生苗上取食24h,每株分別放置100頭(13株),200頭(13株),300頭(13株)。取食后3個月、6個月和12個月,進行DTBIA和RT-PCR檢測,均未能在受毒植株中檢測到CYVCV。5.柑桔粉虱傳毒實驗。將柑桔粉虱成蟲在毒源鳳梨甜橙植株上飼喂48 h,然后將其置于無毒代代酸橙實生苗上取食48 h。3個處理,每個處理23株。取食后3個月和6個月,對受毒植株進行DTBIA和RT-PCR檢測。取食后3個月和6個月,DTBIA與RT-PCR檢測一致,其平均檢出率分別為31.9%和39.1%。本研究首次證實CYVCV可以通過柑桔粉虱成蟲在柑桔間進行傳播。6.污染刀具傳毒實驗。將嫁接刀在毒源植株的莖上重復切割,然后立刻將污染后的嫁接刀在受毒植株的莖部切開,每株接種植株切割50刀。接種后3個月,DTBIA和RT-PCR檢測結果顯示,接種植株的平均檢出率分別為11.7%和16.5%。接種代代酸橙實生苗中的感病植株在接種后2個月,表現出明顯的柑桔黃化脈明病癥狀。接種后6個月,DTBIA和RT-PCR檢測結果顯示,代代酸橙的平均檢出率分別為20.4%和23.3%。接種后3個月和6個月,DTBIA和RT-PCR檢測結果顯示,接種植株的檢出率均為20.0%。接種后3個月,DTBIA和RT-PCR檢測結果顯示,陽性對照組內的10株柑桔實生苗(5株代代酸橙和5株粗檸檬)均檢測到CYVCV。接種后6個月,在陰性對照組(5株代代酸橙和5株粗檸檬)中均沒有檢測到CYVCV。因此,證實CYVCV可以通過污染刀具方式在柑桔間進行傳播。7.尚未在柑桔黃化脈明病重病果園的龍葵上檢測到CYVCV。
【學位單位】：西南大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：S436.66
【部分圖文】：

（Mandarivirus）的柑桔黃化脈明病毒（Citrus yellow vein clearing virus，CYVCV）[13]。CYVCV 粒子呈彎曲線狀，大小約為（13-14）nm ×685nm[14]。CYVCV 基因組是由 7529 個核苷酸組成的正單鏈 RNA，具有 5′、3′端非編碼區(qū)（UTR）和 Poly（A）結構[13]。部分 CYVCV 毒株 5′UTR 的第 28 和 29 位核苷酸會出現 2 個堿基（“-CA-”）的插入，尚不清楚該結構具有何種功能[15]。CYVCV 的基因組含有 6 個以 ATG 作為起始密碼子，分別以 TAA（ORF1，ORF4，ORF5）和 TGA（ORF2、ORF3、ORF6）為終止密碼子的開放讀碼框（ORFs）。其中 ORF1 編碼病毒的復制酶蛋白，ORF2、ORF3、ORF4 部分重疊組成一個三基因區(qū)域（triple gene block，TGB），分別合成 25kDa、12kDa 和 6.4kDa 的蛋白質，其功能可能與病毒在細胞間的運動有關。ORF5編碼病毒的外殼蛋白。ORF6與ORF5部分重疊，編碼一個23kDa的細胞核酸結合蛋白[13]。通過對不同地區(qū)和不同寄主品種 CYVCV 毒株的全序列分析發(fā)現，該病毒存在較高的保守性，其基因組不因地域、毒株或寄主柑桔品種差異而發(fā)生顯著變異[15-17]。此外，來自中國、巴基斯坦和土耳其的 CYVCV 毒株分別位于進化樹上的不同分支，意味著 CYVCV 可能存在不同的起源地[11]。

第一章 文獻綜述辣椒（Capsicum annuum）、藜麥（Chenopodium quinoa）等草本植物[14]。近年來在錦葵（Malva sylvestris）、龍葵（Solanum nigrum）、野芥（Sinapis arvensis）和田野毛茛（Rananculus arvensis）上亦檢測出了 CYVCV[21]。1.2.1.4 癥狀及品種敏感性CYVCV 在不同柑桔品種上引起的癥狀存在顯著差異，其中檸檬、酸橙和德維特橘橙上的癥狀最為顯著。病株表現出葉脈黃化、脈明、葉背水浸狀、葉片反卷皺縮甚至葉片脫落，影響樹勢和產量。葉片老熟后黃化癥狀消褪并轉綠，但葉片皺縮癥狀不會恢復，且對光看脈明明顯[22]。此外，葡萄柚（C. paradisi）、琯溪蜜柚（C. grandis）、部分甜橙（C. sinensis）和寬皮柑桔（C. reticulata）品種感病后僅春梢嫩葉表現出輕微脈明，且枝梢老熟后癥狀消失[23]。近來的研究還顯示，CYVCV 在不同寄主上引起的癥狀差異與植株中的病毒含量無明顯的相關性[17]。

圖 3.1 4 種節(jié)肢動物 RNA: DL5000 分子量標準；1：繡線菊蚜；2：褐色桔蚜；3：柑桔紅蜘蛛；4：柑桔粉虱A of four arthropods, DL5000 DNA ladders; 1, Aphis spiraecola ; 2, Toxoptera citricidus; 3, Panonychus citri;節(jié)肢動物帶毒情況檢測YVCV 高發(fā)柑桔果園中收集繡線菊蚜、褐色桔蚜、柑桔紅蜘蛛節(jié)肢動物成蟲。利用實時熒光定量 PCR 檢測 4 種節(jié)肢動物帶毒通過 RT-qPCR 法均可以在繡線菊蚜、褐色桔蚜、柑桔紅蜘蛛和檢測到 CYVCV。菊蚜：50頭繡線菊蚜混合時，在30個混樣中，13個混樣未檢測到檢測出 CYVCV，檢出率為 56.7 %。100 頭繡線菊蚜混合時，個混樣未檢出 CYVCV，11 個混樣檢測出 CYVCV，檢出率為 5桔蚜：50 頭褐色桔蚜混合時，在 17 個混樣中，8 個混樣未檢出
【參考文獻】

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本文編號：2857551