發(fā)布時間：2020-10-22 15:51

　　 楊樹是山東省乃至我國北方的一種四旁綠化、農(nóng)田防護(hù)林和速生豐產(chǎn)用材林發(fā)展的主要樹種,在我省經(jīng)濟(jì)、社會和生態(tài)環(huán)境保護(hù)方面均發(fā)揮著重要作用。隨著楊樹人工林栽植面積的不斷擴(kuò)大和品種單一化,楊樹潰瘍病發(fā)生十分嚴(yán)重,嚴(yán)重影響了山東省楊樹人工林的健康持續(xù)發(fā)展。Botryosphaeria屬真菌是引起楊樹潰瘍病的主要病原。為明確山東省楊樹潰瘍病菌種類多樣性,本研究從病菌的培養(yǎng)學(xué)、形態(tài)學(xué)、分子生物學(xué)及致病性等方面開展研究。研究結(jié)果如下:1、實(shí)驗(yàn)對山東省16個地(市)的107、108、110歐美楊樹潰瘍病標(biāo)本進(jìn)行廣泛采集、分離和純化病菌,共采集標(biāo)本78份,分離純化后得到供試菌株52個。2、根據(jù)病菌菌落顏色、大小、氣生菌絲茂密程度、色素和菌落邊緣特征,52個供試菌株分為4個特征類型;根據(jù)病菌在PDA培養(yǎng)基上子實(shí)體特征,發(fā)現(xiàn)楊樹潰瘍病菌子實(shí)體多為黑色或灰白色,表生、半埋生或埋生,單生或聚生,多為球形或扁球形,個別菌株子實(shí)體為單生,其他供試菌株均為單生或者聚生。無性子實(shí)體可產(chǎn)生兩種類型分生孢子:大型分生孢子和小型分生孢子,個別菌株兩種孢子混生。供試菌株中Sdau18-40菌株的分生孢子棕色,Sdau07-159菌株分生孢子初為淡黃色,后變?yōu)闇\棕褐色到深棕褐色,其他菌株分生孢子均為無色。3、通過設(shè)置5℃~40℃等間隔5℃的8個溫度梯度,發(fā)現(xiàn)病菌菌絲生長溫度均在5~40℃范圍,最適溫度為25℃。4、選用ITS、β-tubulin、EF1-α、LSU、SSU、Frpb2 6個特異引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,經(jīng)序列比對,經(jīng)單基因或多基因序列聯(lián)合分析,結(jié)合病菌的培養(yǎng)學(xué)和形態(tài)學(xué)特征,將52個供試菌株鑒定為B.dothidea、B.obtusa、B.rhodina 3個種,其中48個菌株為B.dothidea,占供試菌株的92%,為山東省楊樹潰瘍病菌優(yōu)勢種,而B.rhodina和B.obtusa各2個菌株分別占4%,為山東省楊樹潰瘍病菌偶發(fā)種。系統(tǒng)發(fā)育分析顯示,B.dothidea與B.obtusa和B.rhodina親緣關(guān)系較遠(yuǎn),而B.obtusa與B.rhodina兩者親緣關(guān)系較近,同時B.dothidea存在種內(nèi)分化。5、選擇病菌在培養(yǎng)學(xué)、形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)表現(xiàn)最為典型的代表菌株,室內(nèi)采用人工刺傷接種蘋果果實(shí)的方法進(jìn)行不同種的病菌致病性測定,結(jié)果顯示,楊樹潰瘍病菌3個種致病力存在差異,B.rhodina致病力最強(qiáng),B.dothidea中等,B.obtusa最弱。綜上,實(shí)驗(yàn)明確了山東省楊樹潰瘍病菌的種類和多樣性,引起山東省楊樹潰瘍病的病菌僅發(fā)現(xiàn)3個種,上述研究結(jié)果為未來山東省楊樹潰瘍病的科學(xué)防控提供理論依據(jù)。
【學(xué)位單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S763.7
【部分圖文】：

本研究技術(shù)路線

3.1 楊樹潰瘍病菌培養(yǎng)學(xué)特性根據(jù) 25℃黑暗條件下 PDA 培養(yǎng)基上生長 5d 的供試菌株菌落特征，觀察并比較不同菌株菌落形態(tài)特征、菌絲顏色變化特征、氣生菌絲的生長結(jié)構(gòu)、色素產(chǎn)生、菌落邊緣特征、菌落的背面特征以及產(chǎn)孢情況等，將供試菌株粗略劃分為 4 個培養(yǎng)學(xué)特征類群。類群 1 的主要特征描述：菌落生長速度快，通常在培養(yǎng)的第 3~4d 即可布滿平板。觀察菌落形態(tài)可知，供試菌株菌落邊緣整齊，致密，氣生菌絲較發(fā)達(dá)，菌絲體粗壯，呈棉絮狀，且能直立生長，菌絲生長初期呈現(xiàn)白色、隨著培養(yǎng)時間的延長菌絲逐漸由白色轉(zhuǎn)變?yōu)榛野咨�，大約培養(yǎng) 3d 左右開始產(chǎn)生墨綠色或灰黑色色素沉積，色素沉積速度前期較快，后期較慢，最終整個菌落呈現(xiàn)墨黑色。該類群是 Botryospaeria 真菌屬最顯著的特征表現(xiàn)，也是培養(yǎng)學(xué)分類最好鑒定的一個類群。該類群主要包括 39 個供試菌株，典型的特征見下圖 3-1。

圖 3-2 Botryosphaeria 類群 2 PDA 的培養(yǎng)學(xué)特征（1：Sdau11-40； 2：Sdau18-1；3：Sdau10-6；）Fig. 3-2 Breeding characteristics of Botryosphaeria group 2 PDA（1：Sdau11-40； 2：Sdau18-1；3：Sdau10-6；）類群 3 的主要特征描述：菌落生長速度快，通常在培養(yǎng)的第 2~3d 布滿平板。菌落邊緣整齊，致密，氣生菌絲十分發(fā)達(dá)，菌絲體較粗壯，大約在生長的第 4d 菌絲可生長到培養(yǎng)皿上蓋，從側(cè)面觀察可見菌絲直立且粗壯，在后期培養(yǎng)皿上蓋四周都有菌絲粘連，整個菌落的顏色由無色、灰白色到黑色，第 3d 即可產(chǎn)生黑色或灰黑色的色素，色素沉積也較快，最終菌落呈現(xiàn)黑色。該類群包括 Sdau09-8（菏澤鄆城）和 Sdau09-1（威海乳山）2 個供試菌株，典型的特征見下圖 3-3。
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2851800