柑橘木虱是我國南方柑橘園最常見的害蟲之一,其寄主主要是柑橘等蕓香科植物,是傳播柑橘黃龍病主要的自然媒介。目前,柑橘木虱已呈世界性分布,給全球柑橘產(chǎn)業(yè)帶來了毀滅性災(zāi)難。近年來,柑橘木虱在我國的分布北界發(fā)生明顯北移,為防治黃龍病帶來了嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。本研究對采自中國9省48個(gè)種群的柑橘木虱的樣本,以線粒體Cytb和COI基因?yàn)榉肿訕?biāo)記,對中國柑橘木虱種群進(jìn)行了全面的系統(tǒng)地理學(xué)研究,闡明柑橘木虱分子系統(tǒng)地理結(jié)構(gòu)(主要包括柑橘木虱譜系關(guān)系、單倍型網(wǎng)絡(luò)圖、空間遺傳結(jié)構(gòu)),理清柑橘木虱在中國可能的傳播路徑。主要結(jié)論如下:(1)共得到234條柑橘木虱Cytb序列片段,長度為786bp和229條COI序列片段,長度為706bp,所有序列均已上傳至NCBI。兩種分子標(biāo)記的堿基組成都存在明顯的A+T含量偏向性(Cytb為69.34%,COI為68.13%)。兩種分子標(biāo)記均得到了低的單倍型多樣性(Hd)(Cytb為0.303,COI為0.382)和核苷酸多樣性(pi)(Cytb為0.0007,COI為0.0013)的結(jié)果。(2)Cytb標(biāo)記共發(fā)現(xiàn)12種單倍型,單倍型Hap-1是最常見的單倍型,一共195個(gè)個(gè)體樣品屬于Hap-1,分布在除云南省以外的所有省份。此外,還發(fā)現(xiàn)了6種種群特有單倍型(private haplotypes),其他的單倍型均為種群的共享單倍型(shared haplotypes)。COI分子標(biāo)記共發(fā)現(xiàn)15種單倍型,單倍型Hap-1也是最常見的單倍型,一共有178個(gè)樣品。這178個(gè)樣品同樣分布在除云南省以外的所有省份,屬于最具優(yōu)勢的一種單倍型。此外,還發(fā)現(xiàn)了10種種群特有單倍型。(3)從GenBank中下載到世界范圍內(nèi)的柑橘木虱Cytb和COI基因序列,與本研究所得兩種序列一起進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育分析。系統(tǒng)發(fā)育樹(ML樹和BI樹)均表明,中國柑橘木虱存在一定的地理結(jié)構(gòu)。中國柑橘木虱種群大多屬于A譜系分支,只有云南西雙版納(XS)種群所屬的單倍型屬于B譜系中。兩個(gè)分子標(biāo)記的單倍型網(wǎng)絡(luò)圖同樣顯示,在世界范圍內(nèi)存在有兩個(gè)分支譜系的柑橘木虱,中國南部、東南部以及部分西南地區(qū)的柑橘木虱種群屬于A譜系,B譜系僅僅存在于云南西雙版納。(4)對Cytb和COI分子標(biāo)記的整體數(shù)據(jù)分別進(jìn)行Tajima’s D檢驗(yàn)、Fu’F_S檢驗(yàn),結(jié)果顯示兩種基因受到純化選擇的影響。柑橘木虱自然生存環(huán)境的變化大大增加了這種純化選擇選擇壓力的作用。因此,這種選擇可能會導(dǎo)致單倍型的喪失和具有優(yōu)勢的罕見單倍型的擴(kuò)張。
【學(xué)位單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S436.66
【部分圖文】：

第 2 章 材料與方法第 2 章 材料與方法2.1 材料2.1.1 柑橘木虱樣品采集柑橘木虱樣品主要采自 2016 年至 2018 年的 7～11 月之間。采集地點(diǎn)包括江西省、浙江省、廣東省、湖南省、廣西壯族自治區(qū)、四川省、福建省、云南省以及海南省的柑橘園和公園中，共計(jì) 9 省 48 個(gè)采樣地點(diǎn)，另外還獲得了美國佛羅里達(dá)州的柑橘木虱樣品，具體采樣種群分布情況見圖 2-1 和表 2-1。用含 75%酒精的 1.5ml 離心管捕獲柑橘木虱成蟲。每個(gè)采樣點(diǎn)約采集 100 頭成蟲。寄主植物包括南豐蜜桔、臍橙和九里香等。在提取 DNA 之前，將所有采集到的柑橘木虱成蟲放入含 75%的乙醇溶液中，-80℃中保存。

圖 3- 1 Cytb 分子標(biāo)記單倍型在各省份的分布Figure 3- 1 Distribution of Cytb haplotypes in different provinces單倍型數(shù)量較為豐富的地區(qū)有廣東省、廣西壯族自治區(qū)和江西省。Hap-9 是云南省所特有的單倍型，除在云南省發(fā)現(xiàn)此單倍型外，未在國內(nèi)其他地區(qū)發(fā)現(xiàn)這種單倍型�？傮w上看，中國柑橘木虱種群的單倍型多樣性較低，東南部和南部地區(qū)相對來說單倍型較為豐富。3.1.2 各地區(qū)種群的遺傳距離各種群的種群遺傳距離結(jié)果見表 3-3，在所有地區(qū)的種群中，種群內(nèi)和種間的遺傳距離均較小，均小于 0.010，其中中國西雙版納（XS）種群的遺傳距離最大，為 0.003。中國的地理種群只有西雙版納（XS）種群與中國其他種群之間的遺傳距離相對較高，其他種群之間的遺傳距離均較低，同樣表明柑橘木虱在中國地理種群間存在相對較低的遺傳差異。

結(jié)果如圖3-2。由圖可知，錯(cuò)配分布曲線呈現(xiàn)單峰泊松分布而非多峰形，表明在歷史上柑橘木虱可能經(jīng)受種群擴(kuò)張或持續(xù)增長。3.2 基于 Cytb 序列的全球柑橘木虱遺傳多樣性分析3.2.1 全球 Cytb 序列堿基組成和種群遺傳多樣性從 GenBank 中下載到 232 條世界不同地區(qū)的柑橘木虱 Cytb 序列（表 3-4），與本研究所得序列一起共 466 條 Cytb 序列進(jìn)行整體分析。所有序列經(jīng)過人工校對后，長度為 749bp，四種堿基 A、G、T、C 的平均含量分別 31.33％、11.60％、37.72％、19.19％，A+T 含量為 69.05％，C+G 含量為 30.78％，同樣具有明顯的A+T 偏向性。經(jīng)過 DnaSP 軟件得出
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本文編號：2838677