煙草根黑腐病是一種危害煙草作物的真菌病害,全世界均有發(fā)病,煙草在幼苗期和較大煙株時(shí)均可染病,可使煙草根部變黑腐爛,病株葉片變黃、變薄,嚴(yán)重影響煙草產(chǎn)量和質(zhì)量。目前,我國(guó)學(xué)者對(duì)根黑腐病主要進(jìn)行了分子鑒定、致病力分化和生物學(xué)特性等研究;但安徽省對(duì)根黑腐病目前還沒(méi)有相關(guān)報(bào)道,安徽煙區(qū)煙草根黑腐近年來(lái)也有逐漸加重的趨勢(shì),因此,本研究采集安徽省煙草根黑腐病典型病株,進(jìn)行病原分離鑒定,開(kāi)展生物學(xué)特性的研究、發(fā)病條件研究及煙草品種抗性評(píng)價(jià)研究,并篩選出防治煙草根黑腐病害的有效藥劑及生防菌,以期為安徽省煙草根黑腐病菌的可持續(xù)控制技術(shù)研究提供理論基礎(chǔ),其主要研究結(jié)果如下:1.煙草根黑腐病菌的分離鑒定選用具有典型癥狀的煙草根黑腐病煙株,采用胡蘿卜圓片法分離病原菌,根據(jù)病原菌的培養(yǎng)形態(tài)和rDNA-ITS區(qū)序列對(duì)病原菌種類進(jìn)行鑒定,采用灌根法對(duì)病原菌進(jìn)行致病性測(cè)定,結(jié)果表明:通過(guò)胡蘿卜圓片法對(duì)煙草發(fā)病根部進(jìn)行分離,得到煙草根黑腐病原菌菌株,經(jīng)過(guò)形態(tài)學(xué)觀察和rDNA-ITS分子鑒定,致病性測(cè)定和柯赫氏法則驗(yàn)證,確定安徽省煙草根黑腐病菌為基生根串珠霉[Thielaviopsis basicola(Berk.et Br.)Ferr]。2.煙草根黑腐病菌的生物學(xué)特性試驗(yàn)測(cè)定了煙草根黑腐病菌最適生長(zhǎng)的培養(yǎng)基、最適菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)的溫度、pH值、分生孢子致死溫度,以及病原菌對(duì)碳、氮源的利用情況。結(jié)果表明:煙草根黑腐病病菌最適生長(zhǎng)的培養(yǎng)基分別為V8培養(yǎng)基和PDA培養(yǎng)基,其中在V8培養(yǎng)基菌株生長(zhǎng)最適宜,擴(kuò)展趨勢(shì)較好;病原菌菌絲在15℃~30℃之間生長(zhǎng)良好,最適溫度為25℃,分生孢子在5℃~35℃之間均可以萌發(fā),分生孢子萌發(fā)率最高的溫度為25℃;分生孢子在53℃下水浴10min后,不能萌發(fā);最適pH均為6.0,在pH10~12時(shí),菌株生長(zhǎng)良好;氮源利用上,以尿素、硝酸鋅為最佳氮源,在碳源利用上,以淀粉、麥芽糖、葡萄糖利用最佳,3種碳源差異并不顯著。3.煙草根黑腐病發(fā)病條件及品種抗病性評(píng)價(jià)通過(guò)室內(nèi)盆栽試驗(yàn),研究了pH值、土壤含水量、接種體濃度、施氮量4個(gè)因素對(duì)煙草根黑腐病發(fā)病情況的影響;研究了主栽品種云煙87、云煙97、云煙85、K326、中煙100的抗病性。結(jié)果表明:當(dāng)土壤pH偏弱酸性和堿性,有利于根黑腐病的發(fā)生,pH值較低時(shí)(pH4),能夠抑制病害的發(fā)生;土壤濕度越大,煙草根黑腐病害的發(fā)生越嚴(yán)重,土壤含水量80%時(shí),病株率和病情指數(shù)均最高,分別為88.9%和60.2;接種體濃度高于10~4個(gè)孢子/ml后,發(fā)病率與濃度呈正相關(guān);氮肥用量的增加會(huì)加大煙草黑腐病的發(fā)病率。不同煙草品種間對(duì)煙草根黑腐病具有一定的抗性差異,其中云煙87和云煙97屬高感品種;云煙85和K326屬感病品種;中煙100屬抗病品種,未篩選出高抗品種。4.防治煙草根黑腐病的有效藥劑的篩選采用菌絲生長(zhǎng)速率法和孢子萌發(fā)法測(cè)定了7種藥劑對(duì)安徽省煙草根黑腐病菌[Thielaviopsis basicola(Berk.and Br.)Ferraris]的毒力,并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行藥劑的復(fù)配組合。結(jié)果表明:7種不同殺菌劑中,多菌靈和咪鮮胺對(duì)煙草根黑腐病菌菌絲生長(zhǎng)抑菌效果最好,EC_(50)分別為0.0459μg/mL和0.0876μg/mL,其次抑菌效果較好的是:多吡唑嘧菌酯和苯醚甲環(huán)唑;吡唑嘧菌酯和多菌靈兩種單劑對(duì)煙草根黑腐病菌分生孢子萌發(fā)的抑制效果最好,EC_(50)分別為0.0247μg/mL和0.567μg/mL;苯醚甲環(huán)唑、咪鮮胺、戊唑醇的抑制效果依次降低;由不同單劑組合對(duì)煙草根黑腐病菌抑制試驗(yàn)結(jié)果表明,最優(yōu)的復(fù)配組合分別為多菌靈與苯醚甲環(huán)唑的配比組合A:A和A:D;吡唑嘧菌酯與申嗪霉素的配比組合A:B和C:B。5.枯草芽孢桿菌KC80-6發(fā)酵條件的優(yōu)化及其對(duì)煙草根黑腐病的抑制效果本試驗(yàn)探究了枯草芽孢桿菌KC80-6的三種處理液(活菌液、過(guò)濾液、高溫滅菌液)對(duì)煙草根黑腐病菌菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)的抑制作用,并優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件,以期為煙草根黑腐病的生物防治提供科學(xué)依據(jù)。結(jié)果表明:枯草芽孢桿菌KC80-6對(duì)煙草根黑腐病菌的菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)的均有一定的抑制作用,其中以活菌液效果最好,1×10~7cfu/ml的活菌液對(duì)菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)的抑制率分別達(dá)93.2%、95.3%,1×10~7cfu/ml的過(guò)濾液對(duì)菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)的抑制率為74.9%,93.4%,高溫滅菌液對(duì)菌絲生長(zhǎng)基本無(wú)抑制效果,對(duì)孢子萌發(fā)有較低的抑制作用,且三種處理液隨稀釋倍數(shù)的增加,抑制效果均逐漸降低。通過(guò)單因素試驗(yàn)、正交試驗(yàn)方法,確定該枯草芽孢桿菌KC80-6的優(yōu)化培養(yǎng)基為蔗糖1.5%、酵母浸出物0.5%、硫酸鎂0.06%;最適發(fā)酵條件為初始pH6.5,發(fā)酵溫度28℃,接種量5%,搖床轉(zhuǎn)速180 r/min,搖瓶裝量40 m L/250 m L,為后期的大規(guī)模生產(chǎn)提供依據(jù)。6.化學(xué)藥劑及生防菌對(duì)煙草根黑腐病的田間控病效果在室內(nèi)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,以云煙87為試驗(yàn)對(duì)象,對(duì)室內(nèi)篩選出的有效藥劑及生防菌開(kāi)展田間控病效果研究,以期為大田推廣提供科學(xué)依據(jù)。結(jié)果表明:6種單劑及2種復(fù)配劑對(duì)煙草根黑腐病均有一定的防治效果,其中,80%多菌靈可濕性粉劑、70%甲基托布津可濕性粉劑、50%咪鮮胺錳鹽可濕性粉劑和復(fù)配2(多菌靈:苯醚甲環(huán)唑)800倍液防治效果相對(duì)較好,平均防效分別為92.48%、90.9%、84.15%、79.19%,且防效較穩(wěn)定,具有一定的推廣價(jià)值;生防菌活菌液對(duì)煙草根黑腐病大田防效達(dá)87.34%,且對(duì)煙株的生長(zhǎng)具有一定的促進(jìn)作用,為后期的大田生產(chǎn)使用提供科學(xué)依據(jù)。
【學(xué)位單位】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S435.72
【部分圖文】：

4 結(jié)果與分析4.1 煙草根黑腐病病原分離鑒定及致病性測(cè)定4.1.1 病原菌的形態(tài)學(xué)鑒定該菌株在 V8 培養(yǎng)基上生長(zhǎng)較緩慢，菌落顏色為黑褐色，菌絲茂密（圖 4-1），菌絲初透明無(wú)色，后呈褐色，有分隔，并呈 Y 分支，能產(chǎn)生兩種類型的無(wú)性孢子，一種為內(nèi)生分生孢子，由分生孢子梗頂端射出，無(wú)色，透明，呈圓柱形；另外一種無(wú)性孢子是厚垣孢子，呈鏈條狀，可產(chǎn)生于菌絲頂端或側(cè)面，多細(xì)胞，壁厚，厚垣孢子由兩部分組成，基部由 1-3 個(gè)無(wú)色透明細(xì)胞，上部 4-5 個(gè)褐色細(xì)胞，成熟時(shí)，可分裂為單個(gè)細(xì)胞單獨(dú)萌發(fā)（圖 4-2）。

4 結(jié)果與分析4.1 煙草根黑腐病病原分離鑒定及致病性測(cè)定4.1.1 病原菌的形態(tài)學(xué)鑒定該菌株在 V8 培養(yǎng)基上生長(zhǎng)較緩慢，菌落顏色為黑褐色，菌絲茂密（圖 4-1），菌絲初透明無(wú)色，后呈褐色，有分隔，并呈 Y 分支，能產(chǎn)生兩種類型的無(wú)性孢子，一種為內(nèi)生分生孢子，由分生孢子梗頂端射出，無(wú)色，透明，呈圓柱形；另外一種無(wú)性孢子是厚垣孢子，呈鏈條狀，可產(chǎn)生于菌絲頂端或側(cè)面，多細(xì)胞，壁厚，厚垣孢子由兩部分組成，基部由 1-3 個(gè)無(wú)色透明細(xì)胞，上部 4-5 個(gè)褐色細(xì)胞，成熟時(shí)，可分裂為單個(gè)細(xì)胞單獨(dú)萌發(fā)（圖 4-2）。

圖 4-3 病原菌的 ITS -PCR 擴(kuò)增電泳圖Fig.4-3 ITS -PCR amplification of pathogenic bacter

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2824735