抗菌肽是宿主在免疫過程中產(chǎn)生的一類重要抗菌復(fù)合物。家蠶Attacin 1(BmAttacin1)蛋白是抗菌肽中的一種,其開放閱讀框(ORF)編碼214個(gè)氨基酸。我們的前期研究中發(fā)現(xiàn)BmAttacin 1基因在球孢白僵菌(Beauveria bassiana)感染的家蠶幼蟲體內(nèi)顯著上調(diào)表達(dá)。本文運(yùn)用生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)其N端1~17號(hào)氨基酸為信號(hào)肽,成熟蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)主要形成反平行β-片層結(jié)構(gòu);實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果進(jìn)一步證明家蠶幼蟲在被球孢白僵菌感染后BmAttacin 1基因顯著上調(diào)表達(dá)。以家蠶大造(p50)品種幼蟲三齡起蠶cDNA為模板,克隆出BmAttacin 1成熟蛋白編碼序列,利用原核表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)獲得BmAttacin 1蛋白,抑菌圈實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明BmAttacin 1對(duì)革蘭氏陰性菌大腸桿菌(Escherichia coli)和球孢白僵菌有明顯的抑菌效果,而對(duì)革蘭氏陽性菌枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)沒有抑菌效果;進(jìn)一步將BmAttacin 1與球孢白僵菌分生孢子孵育,間接免疫熒光檢測(cè)發(fā)現(xiàn)BmAttacin 1能與球孢白僵菌分生孢子結(jié)合。在家蠶培養(yǎng)細(xì)胞(BmN)過表達(dá)BmAttacin 1基因后,家蠶其它七種抗菌肽基因也都上調(diào)表達(dá),其中天蠶素類抗菌肽BmCecropin A基因的表達(dá)上調(diào)了10倍,BmCecropin B上調(diào)了9倍,表明BmAttacin 1基因的表達(dá)可能對(duì)其它抗菌肽基因的表達(dá)具有協(xié)同增強(qiáng)作用。本結(jié)果為深入研究BmAttacin 1與球孢白僵菌的相互作用以及BmAttacin 1在家蠶抵御球孢白僵菌感染過程中發(fā)揮的作用奠定了一定的基礎(chǔ)。家蠶Cecropin A(BmCecropin A)也是抗菌肽的一種,其ORF編碼63個(gè)氨基酸。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)BmCecropin A在家蠶體內(nèi)體外都對(duì)球孢白僵菌有明顯的抑菌作用,但其發(fā)揮作用的具體機(jī)制還不清楚。本文根據(jù)NCBI登錄的BmCecropin A的ORF序列,運(yùn)用生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)其1~22號(hào)氨基酸為信號(hào)肽,抗原表位氨基酸序列為AIAVIGQA,結(jié)合對(duì)BmCecropin A成熟肽結(jié)構(gòu)的分析及同源序列的比對(duì),化學(xué)合成法合成BmCecropin A 23~63以及51~63兩條氨基酸序列,分別偶聯(lián)KLH和BSA后以此為抗原混合免疫Balb/c小鼠,蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)結(jié)果表明免疫后的小鼠血清對(duì)BmCecropin A具有特異性抗原抗體反應(yīng);通過細(xì)胞融合和雜交瘤細(xì)胞株篩選,獲得兩株陽性雜交瘤細(xì)胞。利用雜交瘤細(xì)胞株培養(yǎng)基上清對(duì)大造品系家蠶血淋巴進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡檢測(cè),結(jié)果顯示其中一株雜交瘤細(xì)胞分泌的單克隆抗體能在PVDF膜上與抗原結(jié)合產(chǎn)生單一條帶,大小約為5 kD,即為目的蛋白BmCecropin A,表明該雜交瘤細(xì)胞株產(chǎn)生的單克隆抗體可識(shí)別BmCecropin A的線性表位,不依賴于抗原的特定構(gòu)象。用該株雜交瘤細(xì)胞制備單克隆抗體并通過蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)BmCecropin A在家蠶各組織中的特異性表達(dá)情況,結(jié)果僅在脂肪體組織中檢測(cè)到特異性抗體抗原反應(yīng)。異丙醇沉淀法提取家蠶血淋巴蛋白,蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)感染球孢白僵菌32 h的家蠶幼蟲血淋巴中抗菌肽Cecropin A上調(diào)表達(dá)。本結(jié)果為BmCecropin A的深入研究及論證其在家蠶抵御球孢白僵菌侵染過程中發(fā)揮的重要作用奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：江蘇科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S884

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 趙文靜;張晶;張春林;翟素珍;王吉平;;致倦庫蚊Cecropin基因家族的比較和系統(tǒng)發(fā)育分析[J];基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué);2016年02期

2 Xueli Zheng;Wei Wang;;High-level expression of housefly cecropin A in Escherichia coli using a fusion protein[J];Asian Pacific Journal of Tropical Medicine;2010年06期

3 ;Effects of cecropin-XJ on growth and adherence of oral cariogenic bacteria in vitro[J];Chinese Medical Journal;2005年02期

4 竇非 ,謝維 ,董雪吟 ,徐賢秀;The terminal structure plays an important role in the biological activity of cecropin CMIV[J];Science in China(Series C:Life Sciences);1999年05期

5 王煒;鄭學(xué)禮;;家蠅Cecropin基因的原核表達(dá)及表達(dá)產(chǎn)物的免疫學(xué)鑒定[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2009年05期

6 李波;張耀洲;;抗菌肽Cecropin及其在轉(zhuǎn)基因植物抗菌中的應(yīng)用[J];中國(guó)生物工程雜志;2008年05期

7 董麗娜;姜寧;張愛忠;于治國(guó);王秋麗;;天蠶素抗菌肽的研究與應(yīng)用[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2017年17期

8 汪以真,王中強(qiáng),許梓榮;抗菌肽與抗生素的體外抗菌效果比較[J];中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào);2004年03期

9 謝維,邱奇峰,董雪吟,華子春,徐賢秀;Fusion expression of mutated cecropin CMIV in E. coli[J];Science in China(Series C:Life Sciences);1997年03期

10 ;Cecropin B gene transformed rice (Oryza sativa L.) plants show improved resistance to rice bacterial diseases[J];Chinese Rice Research Newsletter;1995年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 ;Study of high-level expression of Musca domestica cecropin with partner molecular in Escherichia coli[A];格萊姆抗菌肽——抗菌肽開發(fā)與應(yīng)用技術(shù)研討會(huì)論文集[C];2009年

2 胡叢武;李瑞林;侯成香;高坤;耿濤;郭錫杰;;家蠶抗菌肽Cecropin A單克隆抗體制備及其對(duì)Cecropin A組織特異性表達(dá)檢測(cè)[A];中國(guó)蠶學(xué)會(huì)2018年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2018年

3 宋雪瑩;馮興軍;李靜;許文杉;;雜合抗菌肽LfcinB-Cecropin在大腸桿菌中的高效表達(dá)及其活性鑒定[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)分會(huì)第十一次全國(guó)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2012年

4 孫振鈞;;蚯蚓抗菌肽研究進(jìn)展[A];畜牧業(yè)環(huán)境、生態(tài)、安全生產(chǎn)與管理——2010年家畜環(huán)境與生態(tài)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

5 Xubiao Wei;Dayong Si;Zhaojun Zheng;Lulu Zhang;Rujuan Wu;Rijun Zhang;;A Novel hybrid peptide Cecropin A(1-8)-LL37(17-30)with great Antibacterial Activity[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物微生態(tài)學(xué)分會(huì)第五屆第十二次全國(guó)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2016年

6 楊婉瑩;程廷才;Mingqiang Ye;Xiaojuan Deng;Huiyu Yi;Yadong Huang;Xiang Tan;Dong Han;Bo Wang;Zhonghuai Xiang;曹陽;夏慶友;;Functional Divergence among Silkworm AntimicrobialPeptide Paralogs by the Activities of Recombinant Proteins and the Induced Expression Profiles[A];廣東省遺傳學(xué)會(huì)第九屆代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)研討會(huì)論文及摘要匯編[C];2014年

7 陳香;譙仕彥;祝發(fā)明;曹云鶴;;一種高效表達(dá)抗菌肽Cecropin AD的枯草芽孢桿菌基因工程菌株的構(gòu)建及表達(dá)產(chǎn)物抗菌活力的研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2009學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2009年

8 王學(xué)楊;李濤;徐家萍;李木旺;孫霞;吳陽春;;家蠶免疫相關(guān)基因Bm18w的鑒定及功能分析[A];中國(guó)蠶學(xué)會(huì)第十四屆暨國(guó)家蠶桑產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系家（柞）蠶遺傳育種學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2018年

9 李巍;仲飛;李秀錦;張峰;劉龍飛;王幸興;潘素敏;韓冬梅;;重組豬蛔蟲抗菌肽cecropin P1在畢赤酵母中的表達(dá)及抑菌活性[A];全國(guó)動(dòng)物生理生化第十一次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文摘要匯編[C];2010年

10 Xu-Biao Wei;Ru-Juan Wu;Da-Yong Si;Xiu-Dong Liao;Lu-Lu Zhang;Ri-Jun Zhang;;Novel Hybrid Peptide Cecropin A(1-8)-LL37(17-30)with Potential Antibacterial Activity[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物微生態(tài)學(xué)分會(huì)第五屆第十二次全國(guó)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2016年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前7條

1 武如娟;抗菌抗病毒雜合肽Cecropin(1-8)-LL37(17-30)抗菌機(jī)理、重組表達(dá)和特性研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 李小永;Cecropin B-LHRH'重組基因的構(gòu)建表達(dá)及其抑癌功能[D];吉林大學(xué);2006年

3 鄭青;新型抗菌肽基因的設(shè)計(jì)、合成與表達(dá)研究[D];華南理工大學(xué);1997年

4 周小喬;抗菌肽Cecropin B對(duì)豬關(guān)鍵藥物代謝酶CYP3A29的表達(dá)調(diào)控及分子機(jī)制研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

5 翁宏飚;昆蟲抗菌肽Cecropin B和Thanatin的雜合基因設(shè)計(jì)與表達(dá)研究[D];浙江大學(xué);2003年

6 李波;天蠶素的規(guī)模化制備及其在斷奶仔豬日糧中的應(yīng)用研究[D];吉林大學(xué);2015年

7 胡翰;α螺旋抗菌肽與α防御素4抗病原微生物活性及作用機(jī)制研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 陳朝霞;家蠅抗菌肽Cecropin抗HBV作用機(jī)制研究[D];廣東藥科大學(xué);2019年

2 胡叢武;家蠶抗菌蛋白Attacin 1對(duì)球孢白僵菌的抗菌活性及抗菌肽Cecropin A的表達(dá)特征[D];江蘇科技大學(xué);2019年

3 衛(wèi)瑞陽;家蠅cecropin-A2和lectin subunit alpha蛋白對(duì)金黃色萄球菌的抑制及其抗炎活性研究[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

4 王吉平;致倦庫蚊天蠶素（Cecropin）基因家族的克隆和表達(dá)分析[D];貴州醫(yī)科大學(xué);2016年

5 張?zhí)m廷;新疆家蠶抗菌肽的分子改造及其結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系[D];新疆大學(xué);2008年

6 陳婉嫻;抗菌肽Cecropin P1在畢赤酵母中的表達(dá)與活性研究[D];華東理工大學(xué);2011年

7 韓玉萍;抗菌肽Cecropin X基因的克隆及其在大腸桿菌中的融合表達(dá)[D];四川大學(xué);2006年

8 王軍政;cecropin B分泌型融合基因的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)化柑桔的研究[D];西南大學(xué);2012年

9 王珍;Cecropin AD在畢赤酵母中的組成型表達(dá)及對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響[D];青島農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

10 李巍;重組豬蛔蟲抗菌肽Cecropin P1在畢赤酵母中的表達(dá)及抑菌活性的研究[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

本文編號(hào)：2814532