無刺蜂蜂膠(Geopropolis)是由蜜蜂科(Apidae)無刺蜂屬(Trigona)的無刺蜂昆蟲通過采集不同植物的嫩芽、樹脂的分泌物以及自然中的土壤顆粒,混入自身分泌物形成的粘滯度較高的固形物質(zhì)。受無刺蜂蜂種、地理環(huán)境、當(dāng)?shù)刂参锬z源差異以及不同的采膠時間等內(nèi)在、外在因素影響,無刺蜂蜂膠有著獨特而又復(fù)雜的化學(xué)組成,主要成分包括萜類、黃酮類、酚酸類、植物甾醇類和氧雜蒽酮類化合物,以及維生素、礦物質(zhì)、游離脂肪酸、可水解單寧、皂甙、生物堿等。無刺蜂蜂膠復(fù)雜的化學(xué)組分決定了其多種活性,如抗氧化、抑菌、抗腫瘤、抗增殖、抗炎、抗病毒、抗突變等。與西方蜜蜂(Apis mellifera)所采集的蜂膠(Propolis)不同,無刺蜂蜂膠中的萜類化合物豐富含量較高,是其生物活性的重要物質(zhì)基礎(chǔ)及揮發(fā)性成分的主要來源,然而當(dāng)前相關(guān)研究較為不足。Heterotrigona itama是一種廣泛分布于熱帶地區(qū)的無刺蜂蜂種,本實驗以采集于馬來西亞沙撈越州的無刺蜂H.itama所產(chǎn)蜂膠為研究對象,針對其萜類成分優(yōu)化提取及相關(guān)活性進行研究。主要研究結(jié)果如下:1.通過單因素實驗設(shè)計以及響應(yīng)面優(yōu)化無刺蜂H.itama蜂膠中萜類成分的提取效率得出最佳工藝參數(shù):95%的乙醇浸提蜂膠在浸提時間為72 h、料液比1:30 g/mL、浸提3次時,無刺蜂H.itama蜂膠中的萜類物質(zhì)提取率最高(46.44±0.07%)。2.根據(jù)實驗室現(xiàn)有的五種萜類標(biāo)準(zhǔn)品和制備純品,通過LC-MS/MS(液相色譜-二級質(zhì)譜聯(lián)用)對無刺蜂H.itama蜂膠中的主要萜類成分相對含量進行分析,結(jié)果表明無刺蜂H.itama蜂膠含有(24E)-Dammara-20,24-dien-26-al 0.926 mg/g,α-香樹精 1.029 mg/g,24(E)-cycloart-24-ene-26-o1-3-one 0.304 mg/g,20-hydroxy-24-dammaren-3-one 0.343 mg/g,龍腦香醇酮0.441 mg/g。3.利用體外清除自由基實驗和細菌脂多糖(LPS)誘導(dǎo)小鼠巨噬細胞炎癥實驗?zāi)Ｐ?評價無刺蜂H.itama蜂膠的抗氧化和抗炎癥活性。體外實驗表明H.itama蜂膠優(yōu)化提取物的DPPH自由基和ABTS自由基清除率ICso分別為630.31±0.76 μg/mL和321.58±3.67μg/mL;細胞實驗結(jié)果表明H.itama蜂膠優(yōu)化提取物可能通過抑制促炎癥基因iNOS(誘導(dǎo)型一氧化氮合酶)、IL-1β(白介素-1β)、IL-10(白介素-10)mRNA相對表達和促進抗氧化基因HO-1(血紅素氧合酶1)mRNA相對表達來抑制炎癥反應(yīng)。綜上,本課題優(yōu)化了無刺蜂H.itama蜂膠中的萜類成分提取工藝參數(shù);檢測了無刺蜂H.itama蜂膠萜類優(yōu)化提取物中的五種主要萜類成分含量;驗證了無刺蜂H.itama蜂膠萜類優(yōu)化提取物具有較好的抗炎活性和一定的抗氧化性。該研究結(jié)果可作為理論依據(jù)來促進無刺蜂H.itama蜂膠資源的開發(fā)與產(chǎn)品生產(chǎn)應(yīng)用。
【學(xué)位單位】：揚州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：S896.6
【部分圖文】：

ｍｇ／ｍｌ邋的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別移取邋０．７ｍＬ、０．９ｍＬ、ｌ．ｌｍＬ、１．３ｍＬ、１．５ｍＬ、１．７ｍＬ邋的標(biāo)準(zhǔn)逡逑品６０°Ｃ水浴蒸干，按如上方法進行同樣操作，最后進行測定并制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。橫坐標(biāo)為熊逡逑果酸標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量為橫坐標(biāo)，縱坐標(biāo)為ＯＤ５４４ｎｍ吸光值，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖２．１，曲線回歸逡逑：＾ｇｙ＝４．１１４４ｘ－０．０２４８，Ｒ２＝０．９９４９。逡逑熊果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線逡逑￡邋０．９逡逑Ｃ逡逑？邋０－８邐ｙ邋＝邋４．１１４４Ｘ－０．０２４８邋ｆ逡逑Ｑ邋０．７邐Ｒ＾邋＝邋０．９９４９．．．逡逑0邋？？？？？？逡逑０．６邋？？？？？逡逑０．５逡逑０．４邐．？？？？，？？逡逑０．３逡逑０．２邋一逡逑０，１邋邐—逡逑邐邐邐邐］邐逡逑ｎ邋，邐０．０５邐０．１邐０．１５邐０｜２逡逑－ｕ．邋ｉ逡逑質(zhì)量／ｆｉｇ逡逑圖２．１熊果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線逡逑Ｆｉｇ．邋２．１邋Ｕｒｓｏｌｉｃ邋ａｃｉｄ邋ｓｔａｎｄａｒｄ邋ｃｕｒｖｅ逡逑２．３單因素實驗逡逑以不同浸提溶劑、不同乙醇濃度、不同料液比、最佳浸提時間、不同浸提次數(shù)等５個逡逑單因素分別進行無刺蜂／／．／ｔｏＡＴＷ蜂膠的提取，考察提取產(chǎn)物中的萜類成分含量。蜂膠中萜逡逑類成分提取得率計算公式如下：逡逑

圖２．２ＡＢ交互項的響應(yīng)曲面圖逡逑Ｆｉｇ．邋２．２邋Ｒｅｓｐｏｎｓｅ邋ｓｕｒｆａｃｅ邋ｇｒａｐｈ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ＡＢ邋ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ邋ｉｔｅｍ逡逑如圖２．２所示，當(dāng)固定液料比這一實驗因素，來觀察提取時間和浸提次數(shù)兩種因素對逡逑無刺蜂／／．邋／ｔｏ／ｍｚ蜂膠萜類成分提取率的影響時可以看出，提取時間和浸提次數(shù)對無刺蜂／／．逡逑／ｔａｍａ蜂膠萜類成分提取率均有一定影響，提取T間和浸提次數(shù)的交互作用對無刺蜂／／逡逑／ｔｏｍａ蜂膠萜類成分提取率的影響也比較顯著。逡逑提S未義希回賀耍常板鍈楨義希矗福卞危卞危殄澹澹五澹у澹澹誨澹危澹�，逦．邋ａ邋＇逦＼辶x希悖閡毫媳儒我誨澹村危粒禾崛″澹咤危梗矗埃板遒ゅ澹咤蹇у澹梗福埃板義希保埃板澹保埃板義希羅炄∈盶″義賢跡玻沖澹粒媒換ハ畹南煊η嬙煎義希疲椋紓澹玻沖澹遙澹螅穡錚睿螅邋澹螅酰潁媯幔悖邋澹紓潁幔穡楨澹錚駑澹簦瑁邋澹粒緬澹椋睿簦澹潁幔悖簦椋錚鑠澹椋簦澹礤義先繽跡玻乘荊憊潭ń崠問庖皇笛橐蛩�，来观察提取时间壶r毫媳攘街忠蛩囟藻義銜藪譚洌澹簦錚恚攴浣狠評喑煞痔崛÷實撓跋焓笨梢鑰闖觶崛∈奔浜鴕毫媳榷暈藪譚洌義弦卜浣狠評喑煞痔崛÷示幸歡ㄓ跋

本文編號：2813395