秋海棠是中國(guó)最重要的園藝觀賞植物之一,作為盆栽植物被廣泛種植。2017年,秋海棠炭疽病在山西省太谷縣花卉種植溫室嚴(yán)重發(fā)生,給種植者造成重大經(jīng)濟(jì)損失。本文對(duì)該病害進(jìn)行了病原菌鑒定、生物學(xué)特性及生物防治等方面的研究,結(jié)果如下:1.秋海棠炭疽病主要危害莖和葉。莖部病斑梭形,褐色,凹陷,后期病斑表面密生小黑點(diǎn)。葉片受害多從葉緣開始發(fā)病,多為褐色、不規(guī)則形病斑,其上產(chǎn)生稀疏小黑點(diǎn),隨著病斑擴(kuò)展,全葉焦枯死亡。2.從秋海棠不同發(fā)病部位分離純化病原菌并接種在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)上,25℃培養(yǎng)10天。在PDA上,菌落初為灰白色,后由淺灰變至深灰色,邊緣平滑,氣生菌絲稀疏。菌落平均生長(zhǎng)速率為11.2mm.d-1。培養(yǎng)10d后,產(chǎn)生分生孢子盤,分生孢子溢出形成粉紅色黏孢子團(tuán)。分生孢子無色,單胞,鐮刀形,中央有1個(gè)油球,大小為18.5-27.6 μm×1.9-4.7 μm(平均大小23.0×3.2 μm)。分生孢子盤上有剛毛數(shù)根,剛毛直,暗褐色,具隔膜。形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果表明,秋海棠炭疽病病原菌為 Colletotrichum truncatum。3.選取代表菌株TGBC1、TGBC2、TGBC3進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定。利用內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS1/ITS4)、3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)和p-微管蛋白(TUB2)三種引物分別對(duì)代表菌株進(jìn)行PCR擴(kuò)增,獲得ITS-rDNA序列(GenBank登錄號(hào)MG009236,MG009237,MG009238),GAPDH 序列(MG686558,MG686559,MG686560)和p-微管蛋白序列(MG686561,MG686562,MG686563),在 GenBank 網(wǎng)站進(jìn)行分析比對(duì)發(fā)現(xiàn)3種序列與C.truncatum(KP748222,KP823799,KF697365)的序列相似性為99%-100%。4.將代表菌株孢子懸浮液(濃度為106個(gè).mL-1)噴于健康秋海棠植株表面,以無菌水作為對(duì)照。5天后,接菌植株葉部和莖部表現(xiàn)感病癥狀,對(duì)照植株無發(fā)病癥狀。根據(jù)柯赫氏法則,證明C.rruncattum為引起秋海棠炭疽病的病原菌。這是C.truncatum為害中國(guó)秋海棠的首例報(bào)道。5.本試驗(yàn)對(duì)不同溫度、pH、碳源、氮源對(duì)秋海棠炭疽病菌的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)和分生孢子產(chǎn)生的影響進(jìn)行了研究,發(fā)現(xiàn)秋海棠炭疽病菌最適生長(zhǎng)溫度為25-30℃,最適生長(zhǎng)pH值為7;菌絲對(duì)多種單糖和雙糖等碳源及有機(jī)氮、無機(jī)氮均可利用,最適碳源為葡萄糖,最適氮源為硝酸鈉和甘氦酸。分生孢子萌發(fā)的適宜溫度范圍是30-35℃。6.生防因子篩選結(jié)果表明,供試菌株中Jk-2、D-9、D-29、D-23均對(duì)秋海棠炭疽病菌有一定的抑制效果。其中枯草芽孢桿菌D-29抑菌效果最佳。供試14種植物提取物在2.0 mg.mL-1的質(zhì)量濃度下對(duì)秋海棠炭疽病菌菌絲的生長(zhǎng)均有抑制作用。丁香、石菖蒲、蛇床子、獨(dú)活4種植物提取物的抑菌活性可達(dá)80%以上,其中丁香提取物對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制效果最佳,抑菌活性高達(dá)100%。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)丁香提取物對(duì)秋海棠炭疽病菌菌絲生長(zhǎng)的抑菌活性與質(zhì)量濃度的變化之間的關(guān)系呈正相關(guān),質(zhì)量濃度為0.5 mg.mL-1的提取物對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制活性可達(dá)87.88%,其EC50值為0.22 mg·mL-1。
【學(xué)位單位】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：S436.8;S476
【部分圖文】：

２．２結(jié)果與分析逡逑２．２．１病害癥狀逡逑發(fā)病部位主要是秋海棠的莖和葉片（圖２－１）。莖部感病初期出現(xiàn)小病斑，后逐漸逡逑擴(kuò)展為梭形、淺褐色、凹陷病斑，嚴(yán)重時(shí)擴(kuò)展至整莖，病斑表面密生小黑點(diǎn)，發(fā)病后期逡逑整個(gè)莖縊縮成線狀。葉片受害多從葉緣開始發(fā)病，多為褐色、不規(guī)則形病斑，其上產(chǎn)生逡逑稀疏小黑點(diǎn)，隨著病斑擴(kuò)展，全葉焦枯死亡。嚴(yán)重時(shí)整株死亡。逡逑圖２－１炭誼菌病軎癥狀逡逑Ｆｉｇ２－ｌＴｈｅ邋ｓｙｍｐｔｏｍｓ邋ｏｆ邋ｂｅｇｏｎｉａ邋ａｎｔｈｒａｃｎｏｓｅ逡逑２．２．２病原菌的形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果逡逑分離純化獲得的菌株在ＰＤＡ上培養(yǎng)性狀一致。菌落初為灰白色，后由淺灰變至逡逑深灰色，邊緣平滑，氣生菌絲稀疏（圖２－２），菌落平均生長(zhǎng)速率為ｌｌＪｍｎｖｄ－１。培逡逑養(yǎng)１０ｄ后，在ＰＤＡ上產(chǎn)生半埋生分生孢子盤（圖２－３ａ、ｂ、ｃ）。后期可觀察到分生逡逑孢子溢出形成的粉紅色黏孢子團(tuán)（圖２－３ｄ）。逡逑分生孢子盤上有剛毛數(shù)根，剛毛直，暗褐色，具隔膜（圖２－３ｅ）。分生孢子無色，逡逑單胞

株的ＩＴＳ序列與Ｃ」ｒ佭他？的相似性均達(dá)到９９％。構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹結(jié)果表明，ＴＧＢＣ１、逡逑ＴＧＢＣ２、ＴＧＢＣ３邋菌株與邋Ｃ９７４０１、ＫＸ１９７４０２、ＫＸ１９７４０３、ＫＸ１９７４０４逡逑以自展支持率１００％聚在一起（圖２－４）。采用磷酸甘油醛脫氫酶（ＧＡＰＤＨ）和（３－微管逡逑蛋白（ＴＵＢ２）引物分別對(duì)代表菌株進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)增獲得ＧＡＰＤＨ序列（登錄號(hào)分別為逡逑ＭＧ６８６５５８，邋ＭＧ６８６５５９，邋ＭＧ６８６５６０）（圖邋２－５）和ｐ－微管蛋白序列（登錄號(hào)分別為邋ＭＧ６８６５６１，逡逑ＭＧ６８６５６２，邋ＭＧ６８６５６３）（圖２－６），在ＧｅｎＢａｎｋ網(wǎng)站進(jìn)行分析比對(duì)發(fā)現(xiàn)獲得的序列與逡逑的序列相似性為９９。／。－１００％。逡逑Ｆｉｎ逡逑Ｌ＃ｘｙ逡逑圖２－２菌株ＴＧＢＣ１培養(yǎng)性狀（左圖為正面，右圖為背面）逡逑Ｆｉｇ邋２－２邋Ｃｕｌｔｕｒｅ邋ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ邋ｏｆ邋ＴＧＢＣ１邋ｏｎ邋ＰＤＡ逡逑２．２．４致病性測(cè)定結(jié)果逡逑離體有傷回接會(huì)引起秋海棠莖發(fā)病。莖組織變軟內(nèi)陷，濕度較小時(shí)中間灰白色，夾逡逑雜少許小黑點(diǎn)，邊緣暗褐色；濕度大時(shí)，黑色分生孢子盤較多，且有灰白色霉層。植株逡逑活體接種５天后，植株葉部和莖部表現(xiàn)感病癥狀，對(duì)照植株無癥狀表現(xiàn)。根據(jù)柯赫氏法逡逑貝ＩＪ，證明Ｃ．邐為引起秋海棠炭疽病的病原菌。逡逑１１逡逑

邐１逡逑０．２逡逑圖２－６基于ＴＵＢ２序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹逡逑Ｆｉｇ２－６邋Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ邋ｔｒｅｅ邋ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ邋ｂａｓｅ邋ｏｎ邋ｔｈｅ邋ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ邋ｏｆ邋ＴＵＢ２逡逑圖２－７致病性測(cè)定結(jié)果逡逑Ｆｉｇ２－７邋Ｔｈｅ邋ｒｅｓｕｌｔｓ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ邋ｔｅｓｔ逡逑２．３結(jié)論與討論逡逑在對(duì)山西太谷地區(qū)溫室秋海棠早期病害的調(diào)查中發(fā)現(xiàn)有秋海棠炭疽病的發(fā)生。高逡逑溫度、高濕度的環(huán)境條件下炭疽菌極易侵染秋海棠，引起炭疽病的發(fā)生，造成經(jīng)濟(jì)損逡逑１４逡逑

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本文編號(hào)：2808606