【摘要】：由大豆疫霉(Phytophthora sojae)引起大豆疫病是大豆上的毀滅性病害。生物防治是防治該病的有效安全途徑之一。為給大豆疫病生物防治提供新的生防菌資源,并為生防制劑開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù),本學(xué)位論文對大豆疫霉拮抗菌的分離、篩選、鑒定及生防作用進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究,取得的主要結(jié)果如下。1.大豆疫病生防菌的分離、鑒定及生理生化測定從采自安徽省合肥市蜀山區(qū)大楊店大豆田土壤和安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)翠園大豆田土壤中分離到4株對大豆疫霉具有抑制作用的拮抗細(xì)菌,其中2株對大豆疫霉具很強(qiáng)的拮抗作用。首先觀察菌落形態(tài)及測定大豆疫病生防菌的生理生化性質(zhì),生防菌YG-2為革蘭氏陰性、好氧型細(xì)菌,菌落邊緣光滑平整。葡萄糖氧化發(fā)酵實(shí)驗(yàn)為氧化型,不能使明膠液化,可以分解過氧化氫,能使淀粉水解,不能水解纖維素,具有耐鹽性,在含1%、2%和7%NaCl的LB培養(yǎng)液OD_(600)值變化不大�？梢栽趐H為5-10的環(huán)境生長,最適pH為7,可以在10-45℃生長,最適溫度為37℃。夠利用多種物質(zhì)作為碳氮源。經(jīng)16S r DNA序列比對,與序列號:CP019667.1的同源性為99%。據(jù)此,將生防菌YG-2初步鑒定為洋蔥伯克氏菌(Burkholderia cenocepacia)。生防菌YG-4與芽孢桿菌接近,革蘭氏陰性、好氧型細(xì)菌,葡萄糖氧化發(fā)酵實(shí)驗(yàn)為氧化型,能使明膠液化,可以分解過氧化氫,能使淀粉水解,不能水解纖維素,沒有耐鹽性,在含7%NaCl的LB培養(yǎng)液生長緩慢�？梢栽趐H為5-10的環(huán)境生長,最適pH為7,可以在10-45℃生長,最適溫度為37℃。生防菌YG-4能夠利用多種碳氮源。經(jīng)16S r DNA序列比對,序列號:JQ229807.1的同源性為99%。據(jù)此,將生防菌YG-4初步鑒定為解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)。2.生防菌YG-2和YG-4對大豆疫霉的抑制作用及YG-4抑菌圖譜測定由于在實(shí)驗(yàn)的過程中發(fā)現(xiàn)用生防菌對不同地區(qū)的大豆疫霉抑制率有些區(qū)別,故使用生防菌株YG-2和YG-4對8株不同地區(qū)的大豆疫霉P6497,XX2,GZ6,GZ37,SX8,30,LB5-7,GY18-1進(jìn)行抑制率測定。生防菌YG-2和YG-4對不同地區(qū)的大豆疫霉的抑制率有所差異,并且同一種生防菌對不同地區(qū)的大豆疫霉的抑制率也有所差異。生防菌YG-2和大豆疫霉SX8的抑制率最高達(dá)到78.31%(對峙培養(yǎng)第6 d),對GZ37的抑制率最低僅16.88%(對峙第6 d),對P6497的抑制率為59.52%,對XX2的抑制率為62.35%。測定了生防菌YG-4對鏈格孢(Alternaria Nees)、棉花紅粉菌(Trichothecium roseum)、番茄早疫病菌(Alternaria solani)、玉米小斑病菌(Bipolaris maydis)、蘋果炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)、番茄枯萎病菌(Fusarium oxysporum)等13種病原真菌的抑制率。結(jié)果表明,生防菌YG-4對不同病原真菌的抑制效果有很大的差距,對核盤菌抑制率為79.63%,小麥紋枯抑制率為74.07%;對鏈格孢、棉花紅粉病菌、燕麥鐮孢、番茄早疫病菌、玉米小斑病菌、煙草赤星病菌的抑制率從37.04%-55.56%不等;對西瓜枯萎病菌、番茄枯萎病菌抑制能力較弱,對小麥赤霉病菌、馬鈴薯晚疫病菌和蘋果炭疽病菌的抑制率均在10%以下。3生防菌YG-2和YG-4對大豆疫病的防效實(shí)驗(yàn)YG-2發(fā)酵液對大豆疫病的離體葉片防效達(dá)78.57%;YG-4發(fā)酵液對大豆疫病的離體葉片防效達(dá)60.71%。生防菌YG-2發(fā)酵液菌液對大豆疫病的盆栽防效達(dá)60.67%,生防菌YG-4發(fā)酵液菌液對大豆疫病的盆栽防效達(dá)60.00%。洋蔥伯克氏菌YG-2和解淀粉芽孢桿菌YG-4的發(fā)酵液能使大豆疫霉侵染大豆葉片的效果降低,而且生防菌YG-2的發(fā)酵液防治效果比YG-4發(fā)酵液的防治效果要強(qiáng)一些。生防菌發(fā)酵液經(jīng)細(xì)菌過濾器過濾,說明生防菌YG-2和YG-4防治效果不是由于菌種之間活菌的競爭作用,而可能是發(fā)酵液中的某種產(chǎn)物引起的。關(guān)于生防菌YG-2和YG-4的生防作用機(jī)制尚需進(jìn)一步研究探明。
【學(xué)位授予單位】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S476;S435.651
【圖文】：

圖 1 大豆疫霉的危害癥狀Fig. 1 Disease symptom caused by Phytophthora sojae2 大豆疫病病原菌——大豆疫霉大豆疫病是由大豆疫霉（P. sojae）引起的，大豆疫霉屬于藻物界（Chrim門（Oomycola）、卵菌綱（Oomycetes）、腐霉目（Pythiales）、腐霉ythiaceae）、疫霉屬（Phytophthora）。大豆疫霉初生菌絲體為多核無隔菌菌絲為有隔菌絲；菌絲分枝近直角，基部縊縮。菌絲體可形成膨大體、珊瑚狀。其生長溫度為 5-35℃，最適溫度 25℃。大豆疫霉可以在利馬、10%V8 培養(yǎng)基、胡蘿卜培養(yǎng)基、玉米粉培養(yǎng)基等培養(yǎng)基上生長，在 10基上生長最快，氣生菌絲發(fā)達(dá)。在馬鈴薯瓊脂葡萄糖培養(yǎng)基上生長極其入侵大豆后，P. sojae 的菌絲分化成孢子囊，當(dāng)周圍環(huán)境的溫度和濕度時，孢子囊在尖端形成孢子囊[9]。孢子囊形成游動孢子并在成熟后釋放[8]。游動孢子可以在短距離內(nèi)游動到寄主植物的根部，并迅速形成孢子后再次侵入寄主植物。當(dāng)外界環(huán)境變得不利時，P. sojae 通常通過產(chǎn)生無性轉(zhuǎn)變?yōu)橛行苑敝�。卵孢子是一種球形的厚壁休眠孢子，可以抵抗不

圖 2 大豆疫霉的形態(tài)特征Fig. 2 Morphological characteristics of Phytophthora sojaeA:大豆疫霉菌絲分枝近直角，基部稍縊縮 B,C:菌絲膨大體 D,E:無性孢子囊 F:雄器側(cè)生卵孢子疫病發(fā)生規(guī)律：大豆疫霉（P. sojae）主要利用厚壁能抵抗不良環(huán)境的卵病殘體或土壤中越冬。卵孢子是一種厚壁休眠孢子，在土壤在適宜的溫度、濕度、營養(yǎng)物質(zhì)的環(huán)境中產(chǎn)生游動孢子囊。期：孢子囊在適宜環(huán)境可以形成菌絲，在不利環(huán)境（例如一二十個游動孢子。游動孢子寄生并吸附在大豆根部萌發(fā)形大豆等植株。期：發(fā)病植株或病殘體可以通過無性繁殖方式產(chǎn)生游動孢動孢子可以再次侵染其他健康植株，使田間病情成片或成行越冬期：再次進(jìn)入不利環(huán)境，大豆疫霉分化出雄器和藏卵式產(chǎn)生大量卵孢子，卵孢子在植物或雜草的病殘體休眠越冬再次萌發(fā)，侵染寄主植物，完成一年的生活史。

圖 2 大豆疫霉的形態(tài)特征Fig. 2 Morphological characteristics of Phytophthora sojaeA:大豆疫霉菌絲分枝近直角，基部稍縊縮 B,C:菌絲膨大體 D,E:無性孢子囊 F:雄器側(cè)生卵孢子.3 大豆疫病發(fā)生規(guī)律越冬期：大豆疫霉（P. sojae）主要利用厚壁能抵抗不良環(huán)境的卵孢子在雜草的病殘體或土壤中越冬。卵孢子是一種厚壁休眠孢子，在土壤中可以年，其在適宜的溫度、濕度、營養(yǎng)物質(zhì)的環(huán)境中產(chǎn)生游動孢子囊。初侵染期：孢子囊在適宜環(huán)境可以形成菌絲，在不利環(huán)境（例如低溫潮分化成一二十個游動孢子。游動孢子寄生并吸附在大豆根部萌發(fā)形成芽管部侵入大豆等植株。再侵染期：發(fā)病植株或病殘體可以通過無性繁殖方式產(chǎn)生游動孢子囊，釋放游動孢子可以再次侵染其他健康植株，使田間病情成片或成行發(fā)生。第二年越冬期：再次進(jìn)入不利環(huán)境，大豆疫霉分化出雄器和藏卵器，以殖的方式產(chǎn)生大量卵孢子，卵孢子在植物或雜草的病殘體休眠越冬。下一環(huán)境時再次萌發(fā)，侵染寄主植物，完成一年的生活史。

【參考文獻(xiàn)】

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1 韓超;武貴元;劉愛新;王玉軍;;吡咯伯克霍爾德氏菌A12篩選鑒定及其對煙草幼苗的促生作用[J];浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報;2012年05期

2 周林;程萍;喻國輝;黎永堅(jiān);楊紫紅;;枯草芽孢桿菌TR21對香蕉抗病相關(guān)酶活的誘導(dǎo)作用[J];中國農(nóng)學(xué)通報;2011年02期

3 王良華;丁國云;吳翠萍;王源超;鄭小波;;大豆疫霉卵孢子致死溫度的測定[J];植物檢疫;2008年06期

4 楊森;孫高利;董兆麟;段康民;;一株Burkholderia細(xì)菌的抗植物病源真菌及生物學(xué)特性的研究[J];西北大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2008年05期

5 蘭成忠;陳慶河;趙健;邱榮洲;李本金;呂新;翁啟勇;;誘導(dǎo)大豆疫霉菌大量產(chǎn)生游動孢子囊的最佳方法研究[J];江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2007年04期

6 房艷梅;左豫虎;崔素萍;薛成;;大豆疫霉菌對甲霜靈、F500和氟嗎·錳鋅的敏感性及交互抗性研究[J];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報;2007年04期

7 蘭成忠;陳慶河;趙健;邱榮洲;李本金;翁啟勇;;大豆疫霉菌部分生物學(xué)特性及其藥劑篩選研究[J];植物保護(hù);2007年04期

8 劉方平;高智謀;汪小福;於春;潘月敏;;安徽省大豆疫病病原鑒定及生物學(xué)特性研究[J];廣西農(nóng)業(yè)生物科學(xué);2006年01期

9 劉惕若;25%甲霜靈種衣劑防治大豆疫霉根腐病效果研究[J];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報;2004年03期

10 李云鋒,王振中,賈顯祿;稻瘟病菌66 kDa糖蛋白激發(fā)子的純化及性質(zhì)研究[J];植物病理學(xué)報;2004年02期

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1 曹舜;短小芽孢桿菌BS-4菌株對大豆疫病的生防作用及其機(jī)制研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

本文編號：2789153