【摘要】：由稻瘟菌(Magnaporthe oryzae)引起的稻瘟病(Rice blast)是水稻上的主要病害之一,每年會(huì)給水稻生產(chǎn)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。稻瘟菌作為一種模式病原真菌,人們對(duì)其生長(zhǎng)循環(huán)、發(fā)病規(guī)律以及流行特征都有比較清楚的了解。通過(guò)這些特征,人們可以在分子水平上對(duì)稻瘟病開(kāi)發(fā)新的防控策略。在前期研究中表明,稻瘟菌ATP依賴(lài)型Lon蛋白酶(MAP1)可能通過(guò)調(diào)控互作蛋白進(jìn)而調(diào)控稻瘟菌的致病性。因此探究MAP1互作蛋白的功能和作用對(duì)于揭示稻瘟菌致病過(guò)程具有重要意義。Rpl21(Ribosomal Protein L21)就是和MAP1互作的蛋白之一。通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法對(duì)該基因進(jìn)行敲除,獲得了其敲除突變體△rpl21.為了進(jìn)行基因的定位,我們也成功獲得了亞細(xì)胞定位突變體,結(jié)果發(fā)現(xiàn)目的基因定位在細(xì)胞膜或線(xiàn)粒體上。通過(guò)對(duì)野生型和突變體生物學(xué)表型進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)突變體對(duì)SDS更為敏感,分生孢子梗變長(zhǎng),孢子量增多,孢子萌發(fā)提前,附著胞生成率增多,對(duì)水稻的致病力增強(qiáng),在水稻葉鞘菌絲擴(kuò)展的更廣。通過(guò)原核表達(dá)和蛋白純化技術(shù),我們得到了目的蛋白。將蛋白注射煙草葉片中,煙草葉片發(fā)生了過(guò)敏性壞死反應(yīng)。經(jīng)過(guò)以上的研究證明,RPL21基因在調(diào)控稻瘟菌的菌絲生長(zhǎng),分生孢子的形成致病性的生物學(xué)性狀方面起著重要的作用。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：S435.111.41
【圖文】：

第 1 章 文獻(xiàn)綜述頂端便會(huì)開(kāi)始膨大形成附著胞。附著胞成熟后會(huì)有黑色素沉積[17,18]，黑色素允許水分子自由通過(guò)但是會(huì)阻止生物大分子通過(guò)，這使得附著胞擁有巨大的膨壓[19]。之后附著胞產(chǎn)生侵染釘，巨大的膨壓使侵染釘侵入水稻葉片[20-22]。侵染釘侵入細(xì)胞后開(kāi)始形成菌絲，菌絲在細(xì)胞內(nèi)擴(kuò)展，形成病斑。大量的分生孢子會(huì)再?gòu)牟“咛庒尫懦鰜?lái)，再次去侵染周邊的水稻[23]。到秋冬季節(jié)，稻瘟菌以分生孢子或者菌絲體的形式在病稻草、谷粒上過(guò)冬，第二天稱(chēng)為水稻的初侵染源[24]。

圖 1.2 核糖體結(jié)構(gòu)Fig 1.2 Ribosome structure白的分類(lèi)與功能中，核糖體蛋白質(zhì)含有 40S 小亞基和 60S 大亞包括 L1-L49[63,64]。核糖體可以促進(jìn) rRNA 的折蛋白質(zhì)的合成效率。核糖體不僅能參與蛋白質(zhì)細(xì)胞的分裂增殖和凋亡都離不開(kāi)核糖體的調(diào)節(jié)致細(xì)胞代謝失常、細(xì)胞生長(zhǎng)停滯甚至死亡[69]。白 L21 L21（Ribosomal Protein L21，Rpl21）是核糖0,71]。迄今為止，多種生物的 RPL21 基因得以克

2、向 2mL EP 管的中央先后兩次加入 PEG 轉(zhuǎn)化液（60%PEG4000 和 KTC比例為 2:1）500μL，注意混勻。3、置于 28℃培養(yǎng)箱中 30min。4、將 200μL 混合培養(yǎng)液用微量移液器轉(zhuǎn)移至無(wú)任何抗生素的固體 TB3 平板中，用涂布棒輕輕地滑動(dòng)使整個(gè)平板被混合液鋪滿(mǎn)即可，晾干，然后將平板放置于 28℃中過(guò)夜。5、再倒入薄薄的一層含 200μg/mL 潮霉素，400μg/mL 頭孢霉素的固體 TB3培養(yǎng)基，凝固后將其置于28℃恒溫培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)。挑取 TB3 上層培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)化子于含 200μg /mL 潮霉素的 PDA 培養(yǎng)，PCR驗(yàn)證抗潮霉素的菌株 DNA。2.2.8 構(gòu)建 RPL21 敲除載體和互補(bǔ)載體2.2.8.1 構(gòu)建 RPL21 敲除載體

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 李宏宇,魯國(guó)東,王明海,王宗華;稻瘟病菌微波誘發(fā)突變體的分析[J];菌物系統(tǒng);2003年04期

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相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 李健;線(xiàn)粒體ATP-Lon蛋白酶（MAP1）參與稻瘟菌致病和自身防護(hù)的分子證據(jù)[D];吉林大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

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2 李雪松;粟酒裂殖酵母核糖體蛋白L32-1和L32-2功能的初步研究[D];南京師范大學(xué);2013年

本文編號(hào)：2785850