【摘要】：近幾年的研究發(fā)現(xiàn)由擴(kuò)展青霉(Penicillium expansum)引起的柑橘病害日益嚴(yán)重,且P.expansum在侵染宿主過程中會(huì)產(chǎn)生展青霉素(Patulin,PAT)以及桔霉素(Citrinin,CIT)等嚴(yán)重危害人類健康的真菌毒素。目前對(duì)于柑橘采后病原菌侵染機(jī)制的研究主要以指狀青霉(Penicillium digitatum)和意大利青霉(Penicillium italicum)為主,而對(duì)P.expansum侵染柑橘的條件、致病機(jī)制等方面的研究還未見相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。為此,本論文從P.expansum和柑橘的互作角度出發(fā),探討P.expansum侵染柑橘的致病機(jī)制,旨在為柑橘采后病害的防治提供必要的理論依據(jù)。論文的主要研究成果如下:(1)從腐爛柑橘傷口處篩選到一株致病菌H1,經(jīng)ITS區(qū)、BenA、CaM、PRB2序列分析和形態(tài)學(xué)鑒定,確定為擴(kuò)展青霉(P.expansum)。利用高效液相色譜檢測(cè)發(fā)現(xiàn)其能夠產(chǎn)生CIT。(2)研究了不同溫度、保濕時(shí)間和菌齡對(duì)P.expansum H1侵染柑橘的影響,結(jié)果表明,P.expansum H1在25°C時(shí)潛育期最短,侵染能力最強(qiáng),4°C時(shí)P.expansum H1侵染能力受到抑制;保濕時(shí)間越長(zhǎng),越有利于P.expansum H1侵染柑橘;菌齡也會(huì)影響P.expansum H1侵染柑橘,不同菌齡的P.expansum H1侵染能力高低排序?yàn)?培養(yǎng)7 d培養(yǎng)11d培養(yǎng)3 d培養(yǎng)15 d培養(yǎng)19 d。(3)從細(xì)胞壁降解酶和毒素CIT兩個(gè)方面出發(fā),研究P.expansum H1侵染柑橘的致病機(jī)理。結(jié)果表明,P.expansum H1在改良的Marcus培養(yǎng)基和柑橘體內(nèi)均可產(chǎn)生多聚半乳糖醛酸酶(polygalacturonase,PG)、果膠甲基半乳糖醛酸酶(pectin methylgalacturonase,PMG)、內(nèi)切β-1,4-葡聚糖酶(endo-1,4-β-D-glucanase,Cx)和β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase,β-G),酶活性的高低排序皆為PGPMGCxβ-G;將CIT接種到柑橘上會(huì)引起傷口處軟塌腐爛,同時(shí)接種CIT和P.expansum H1的柑橘腐爛程度高于只接種P.expansum H1。此外,研究了不同培養(yǎng)基、溫度、pH、溶氧量和培養(yǎng)時(shí)間對(duì)P.expansum H1生長(zhǎng)和產(chǎn)CIT能力的影響,發(fā)現(xiàn)在25°C,pH為3的YSM培養(yǎng)基上搖床培養(yǎng)2周時(shí),P.expansum H1產(chǎn)生的CIT含量最高。(4)利用轉(zhuǎn)錄組技術(shù),比較分析了P.expansum H1侵染柑橘后基因的表達(dá)情況,結(jié)果顯示,共鑒定出差異表達(dá)基因230個(gè),其中上調(diào)基因178個(gè)占77.4%,下調(diào)基因52個(gè)占22.6%。從中挑選出9個(gè)上調(diào)基因進(jìn)行RT-qPCR驗(yàn)證,其中,有4個(gè)基因與細(xì)胞壁降解酶相關(guān)、1個(gè)基因與CIT的產(chǎn)生相關(guān)、1個(gè)基因與宿主pH的改變相關(guān)、2個(gè)基因與抗氧化應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)、1個(gè)基因與效應(yīng)因子相關(guān)。驗(yàn)證結(jié)果與轉(zhuǎn)錄組結(jié)果一致。
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：S436.66
【圖文】：

2.1 培養(yǎng) 3 d 的菌株 H1 在 PDA 平板上的菌落形態(tài)（A-正面；B-反colony morphology of strain H1 cultured for 3 d on PDA plate (A-the oreverse side) 2.2 培養(yǎng) 7 d 的菌株 H1 在 PDA 平板上的菌落形態(tài)（A:正面；B:反lony morphology of strain H1 cultured 7 d on PDA plate (A-the obverseA B

2.2 培養(yǎng) 7 d 的菌株 H1 在 PDA 平板上的菌落形態(tài)（A:正面；B:反ny morphology of strain H1 cultured 7 d on PDA plate (A-the obverse 圖 2.3 菌株 H1 在柑橘上的生長(zhǎng)狀態(tài)及顯微狀態(tài) growth morphology of the strain H1 on citrus and micro-morphology 的分子生物學(xué)鑒定A B

2.1 培養(yǎng) 3 d 的菌株 H1 在 PDA 平板上的菌落形態(tài)（A-正面；B-反olony morphology of strain H1 cultured for 3 d on PDA plate (A-the obreverse side) 2.2 培養(yǎng) 7 d 的菌株 H1 在 PDA 平板上的菌落形態(tài)（A:正面；B:反ny morphology of strain H1 cultured 7 d on PDA plate (A-the obverse sA BA B

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2779574