【摘要】：小麥紋枯病(wheat sharp eyespot)是由禾谷絲核菌(Rhizoctonia cerealis)和立枯絲核菌(Rhizoctonia solani)引起的一種土傳性真菌病害。該病會嚴(yán)重影響小麥的品質(zhì)和產(chǎn)量。目前我國主栽小麥品種還沒有對小麥紋枯病完全免疫的品種,在生產(chǎn)上主要利用化學(xué)藥劑防治小麥紋枯病,而化學(xué)藥劑污染環(huán)境,還會對小麥產(chǎn)量產(chǎn)生一定的影響。因此,利用對環(huán)境無害的生防菌防治小麥紋枯病有重要意義。本研究中利用前期分離獲得的對小麥紋枯病菌有拮抗作用的枯草芽孢桿菌BS05,利用利福平和鏈霉素標(biāo)記法研究了其在小麥上的定殖規(guī)律,通過室內(nèi)盆栽實驗研究了對小麥的防病促生效果以及防病的機制,利用單因素實驗和正交實驗設(shè)計相結(jié)合的方法優(yōu)化了發(fā)酵培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)條件。得到以下結(jié)論:(1)利用抗生素誘導(dǎo)原始菌株BS05獲得一株能在含300μg/mL鏈霉素和100μg/mL利福平的NA培養(yǎng)基中穩(wěn)定生長的抗生素標(biāo)記菌株BS05~(sr),抗生素標(biāo)記菌株BS05~(sr)表現(xiàn)出良好的耐藥穩(wěn)定性。與原始菌株比較,其細菌群體生長曲線,生物膜形成能力,對病原菌的拮抗作用均與原始菌株無顯著性差異。(2)通過灌根和浸種方式接種枯草芽孢桿菌BS05,菌株BS05可以在小麥上定殖。在兩種處理中,菌株BS05在小麥中的定殖量變化趨勢為先逐漸增加,達到頂峰后逐漸減少,在第30天時仍能夠檢測到菌株BS05存在。其中,灌根處理中,在第7天的定殖量最大,在小麥根、莖、葉中的定殖量分別為1.20×10~5CFU/g、1.02×10~4CFU/g、5.91×10~3 CFU/g。浸種處理中,在第10天的定殖量最大,在小麥根、莖、葉的定殖量分別為8.95×10~4 CFU/g、2.98×10~4 CFU/g、3.87×10~3 CFU/g。(3)菌株BS05能夠誘導(dǎo)小麥幼苗中多酚氧化酶(PPO),過氧化物酶(POD),苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性增加。在實驗中,菌株BS05菌懸液處理對小麥幼苗中PPO,POD,PAL三種酶活性分別增加21.60%,19.92%,28.87%。菌株BS05除菌發(fā)酵液處理對小麥幼苗中PPO,POD,PAL三種酶活性分別增加20.61%,18.43%,24.47%。(4)菌株BS05對小麥的生長有促進作用,菌株BS05浸種處理后小麥株高比對照增加5.49%,鮮重增加27.52%,干重增加28.95%。盆栽實驗表明,菌株BS05對小麥紋枯病有一定的防治效果,對小麥紋枯病的防治效果達到62.77%。(5)菌株BS05的最優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)基組分為蔗糖1.5%、牛肉膏1.0%和KH_2PO_40.10%,最優(yōu)培養(yǎng)條件為培養(yǎng)基初始pH7,培養(yǎng)溫度30℃,轉(zhuǎn)速150r/min,接種量3%。在最優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)基組分和最優(yōu)培養(yǎng)條件下,可以增加抑菌活性物質(zhì)的活性。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S435.121.4;S476.1
【圖文】：

素標(biāo)記菌株 BS05的獲得素逐步誘導(dǎo)，最終獲得一株抗 300μg/mL 鏈霉素和 。所獲得的突變菌株 BS05sr在含 300μg/mL 鏈霉素和A 固體培養(yǎng)基上能正常生長，而原始菌株不能生長。 固體培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)完全一致。素標(biāo)記菌株 BS05sr耐藥穩(wěn)定性檢測在無抗生素選擇壓力下傳代和低溫（4℃）保存兩種能夠在含 300μg/mL 鏈霉素和 100μg/mL 利福平的 表明菌株 BS05sr具有良好的耐藥穩(wěn)定性。素標(biāo)記菌株 BS05sr對小麥紋枯病菌的拮抗作用表明（見圖 3.1），枯草芽孢桿菌 BS05 的抑菌帶寬度 BS05sr抑菌帶寬度均值為 6.9mm，無顯著性差異。株 BS05sr的抗病性質(zhì)沒有發(fā)生改變。

菌株群體生長狀態(tài)比較不同時間點測定菌液 OD600，實驗結(jié)果表明（圖 3.2），兩菌株的吻合，不存在明顯差異，表現(xiàn)出相同的延遲期，指數(shù)期和穩(wěn)定期果表明抗生素標(biāo)記不影響菌株 BS05 的生長。

素標(biāo)記菌株的生物膜形成能力和定量測定相結(jié)合的方法測定了原始物膜形成能力，結(jié)果表明兩者沒有明下主要以生物膜的形式存在，微生物，提高對不良環(huán)境脅迫的抗性，上述異，表明抗生素標(biāo)記菌株 BS05sr可能

【參考文獻】

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本文編號：2770823