發(fā)布時間：2020-06-20 23:26

【摘要】：玉米鐮孢菌莖腐病是玉米生產(chǎn)上的重要病害,該病的發(fā)生不僅給玉米產(chǎn)業(yè)造成重大損失,嚴(yán)重影響了玉米的機(jī)械化收獲,而且病菌產(chǎn)生的毒素嚴(yán)重影響人與家畜的健康。玉米莖腐病病原組成復(fù)雜多變,侵染機(jī)制尚不明確,現(xiàn)階段對玉米莖腐病菌的研究大多局限于單一致病菌侵染。本研究利用ATMT技術(shù)將青色熒光蛋白(CFP,Cyan fluorescent protein)標(biāo)記到禾谷鐮孢,并結(jié)合本實驗室之前獲得的綠色熒光蛋白標(biāo)記的層出鐮孢、紅色熒光蛋白標(biāo)記的擬輪枝鐮孢,將3種不同標(biāo)記的鐮孢菌單獨或者復(fù)合接種到玉米莖部,通過熒光檢測和定量分析比較3者在侵染效能之間的差異,主要結(jié)果如下:1.采用重疊PCR方法改造質(zhì)粒pCAMBIA1300,獲得了帶有青色熒光蛋白基因的質(zhì)粒載體pCAMBIA1300-CFP-Kan,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化將CFP基因?qū)肓撕坦如犳呋蚪M中,通過PCR鑒定以及熒光檢測,獲得了31株青色熒光蛋白標(biāo)記的禾谷鐮孢轉(zhuǎn)化子,從中選擇了4株熒光信號較強的轉(zhuǎn)化子進(jìn)行了致病力鑒定,其中轉(zhuǎn)化子Fg 9的致病力與野生型沒有明顯差異,另外3株轉(zhuǎn)化子的致病力明顯下降。2.選取致病性與野生型菌株沒有明顯差異的禾谷鐮孢轉(zhuǎn)化子Fg 9,與本實驗室前期獲得的綠色熒光蛋白標(biāo)記的層出鐮孢以及紅色熒光蛋白標(biāo)記的擬輪枝鐮孢,單獨或復(fù)合接種到玉米莖基部,于接種后不同時間段取樣觀察。結(jié)果發(fā)現(xiàn),3種鐮孢菌均能單獨侵染玉米莖部組織,但是在玉米莖部的擴(kuò)展能力差異較為明顯,其中接種層出鐮孢、擬輪枝鐮孢的莖部病變較為嚴(yán)重,接種禾谷鐮孢的癥狀較輕;3種鐮孢菌復(fù)合接種時,莖部病變癥狀較單獨接種擬輪枝鐮孢或禾谷鐮孢時嚴(yán)重。3.對接種部位進(jìn)行熒光觀察,發(fā)現(xiàn)層出鐮孢在侵染初期的24~48 h,可在細(xì)胞間隙擴(kuò)展,沿寄主細(xì)胞壁延伸,72 h后開始侵入細(xì)胞,侵染后期(120~144 h)破壞植物細(xì)胞壁結(jié)構(gòu),侵占細(xì)胞內(nèi)部;擬輪枝鐮孢接種后72 h在細(xì)胞間隙可出現(xiàn)明顯擴(kuò)展,而禾谷鐮孢96 h時明顯擴(kuò)展。病菌定殖量分析結(jié)果顯示,在接種后24 h層出鐮孢即可在玉米莖部定殖,后期菌量持續(xù)增加;擬輪枝鐮孢在接種后72 h可以檢測到明顯的菌絲定殖量;禾谷鐮孢的定殖量早期較少,后期增多。復(fù)合接種的玉米莖部,層出鐮孢的侵染從接種后24 h開始,其他兩株鐮孢菌的侵染較晚。4.初步探究了不同溫度(20℃,25℃和30℃)對3種鐮孢菌生長以及分生孢子萌發(fā)的影響。結(jié)果表明,禾谷鐮孢菌落生長的最適溫度為20~25℃,30℃時其生長明顯受到抑制;而層出鐮孢和擬輪枝鐮孢生長最適溫度為25~30℃,兩者卻對低溫較為敏感,在20℃生長緩慢且氣生菌絲較少。孢子萌發(fā)試驗結(jié)果顯示,3 h時層出鐮孢和擬輪枝鐮孢的孢子萌發(fā)速率隨溫度升高而升高,禾谷鐮孢的分生孢子萌發(fā)率隨溫度升高有所降低。
【學(xué)位授予單位】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S435.131

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2723122